Re: [求救] clone不出來
回文補充一下~
因為開頭覺得您目前使用的PCR的 primer及條件似乎目前沒辦法調整到最好
所以感覺這方法作plasmid 確認可能會有些隱性的問題存在
(PCR : P不出來不代表基因確定不存在，可能是沒找到最佳化條件)
所以同時面對萬惡的PCR 及萬惡的 clone 方式時
先拿抽出的plasmid跟空的vector(未切)，兩者分別用EcoRI 作digestion，
然後取一些跑膠
若切出來大小比 空vector大1Kb : 恭喜你! clone基因可能有送入，是PCR的問題!
若切出來是空的，基因確實沒送入載體 :
恭喜你!只要暫且先專心面對clone的問題! PCR就先丟一邊吧!
當然之後若確定確實是clone上的問題的話
可能繼續往上推，在ligation的時候做一個vector only的控制
看看 E. coli 在transformation 只有vector 的生長情況如何
另外上面有許多大家的建議都非常不錯，我也在這找到很多好方法~~
你可以參考並和實驗室或同學討論使用~~
祝順利!!
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※ 編輯: ksn 來自: 140.116.141.23 (01/18 01:17)
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01/19 20:33, , 1F
01/19 20:33, 1F
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