Re: [求救] clone不出來
PCR產物不是單一band,
還往下做,那僅能說一先天不良!
PCR條件可以的話,還是再試一下,
雜band儘量少一點,或是用切膠回收的當模版,
切酵素時間也許可再延長一些。
也許引子設計時的序列也影響到切的效率,
一般catalog上都有不同限制酵素最佳反應序列的列表
後頭那些方法中,要冰-20或4度那見仁見智,
我們實驗室除染色體外,一律冰-20,
能不能做出來對實驗室而言溫度不是問題,
轉形株沒plasmid,那一定是污染,
那可聞一下plate味道是否是E.coli
菌落型態是否為所謂半透明,菌落非正圓.....
常見的污染菌會有酸味,菌落較白與小與圓,
實驗你做的,問題說實在別人能幫得很有限,
畢竟從引子設計開始到最後轉形株的質體的中間過程,
經過許多步驟,每個步驟光打嘴泡都可以說出一堆原因,
最後還是要靠你自己!加油.....加油
十分迷惘時要靠聖經,將它抱在手邊....它是最值得信任的
Molecular cloning : a laboratory manual
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