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作者 bluecsky 在 PTT [ Biotech ] 看板的留言(推文), 共687則

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[求救] transfer buffer電壓過低

[ Biotech ]14 留言, 推噓總分: +9

作者: a9041044 - 發表於 2010/05/06 11:00(14年前)

8^F推bluecsky:應該是錯在調pH值妳讓他buffer能力變低了05/06 17:57

Re: [求救] 請問vector與insert序列中皆有ATG？

[ Biotech ]12 留言, 推噓總分: +4

作者: Fourfish - 發表於 2010/05/01 15:01(14年前)

1^F推bluecsky:其實還有另外一招..你可以做site-direct mutatgenesis05/01 17:16

2^F→bluecsky:把前方的ATG給mutate掉不過有沒有比較快是很難說05/01 17:16

3^F→bluecsky:但是要是你原本的clone就很難做做很久才出來05/01 17:17

4^F→bluecsky:而且又沒有適合的vector來改得話這一招你可以考慮05/01 17:17

10^F推bluecsky:拿掉原本的ATG是很簡單但是會讓他N端多一小段序列出來05/01 19:46

11^F→bluecsky:理論上2個ATG是可能都會做出來但是reading frame的問題05/01 19:47

12^F→bluecsky:可能不會出現兩個差不多長的產物會得話就認命重做吧05/01 19:48

[求救] 請介紹DNA聚合酶給我

[ Biotech ]37 留言, 推噓總分: +12

作者: championelmo - 發表於 2010/05/01 10:51(14年前)

3^F推bluecsky:你要的是不會加A的Taq才對我們lab使用phusion05/01 11:28

4^F→bluecsky:sticky-end PCR我們lab常常使用05/01 11:28

11^F→bluecsky:你可以看看那隻polymerase的說明書一般都會明白跟你講05/01 12:46

12^F→bluecsky:會不會多加A05/01 12:46

15^F→bluecsky:我反而不懂樓上在說什麼囧..05/01 12:48

16^F→bluecsky:歐看懂了沒看到下一段05/01 12:48

19^F推bluecsky:阿...我覺得他真的不是需要restriction enzyme...05/01 12:55

20^F→bluecsky:而是需要不會多加A的DNA polymerase去做PCR..05/01 12:55

22^F推bluecsky:可是推文回答的好像都是DNA polymerase XD05/01 12:58

23^F→bluecsky:他不過問錯方向而已可能只是不知道有這種polymerase罷了05/01 12:59

27^F推bluecsky:你是不是誤會sticky-end PCR的意思阿??05/01 13:12

[求救] western blot壓不出來

[ Biotech ]4 留言, 推噓總分: +1

作者: thewholeshit - 發表於 2010/04/30 10:19(14年前)

2^F推bluecsky:positive有出來那大概是前面sample的問題05/01 17:22

3^F→bluecsky:所以你要思考的不是WB操作方面而是sample方面的問題05/01 17:22

4^F→bluecsky:例如收集sample後怎麼處理到去跑WB05/01 17:22

Re: [討論] 有關Western的小問題

[ Biotech ]19 留言, 推噓總分: +8

作者: complexomic - 發表於 2010/04/30 01:27(14年前)

10^F推bluecsky:是可以回收不過一般都是考慮實驗目的來絕定是否使用回收04/30 20:47

11^F→bluecsky:打錯是"決定"04/30 20:48

12^F→bluecsky:因為如果是一般確認表現用的實驗就用回收的04/30 20:48

13^F→bluecsky:但是如果是重要data 還是會用新的雖然理論上用回收也行04/30 20:49

14^F→bluecsky:不過不會希望到時候做不出來或是做不好又多一個可疑原因04/30 20:49

[求救] western blotting transfer後遺忘它一天後......

[ Biotech ]6 留言, 推噓總分: +5

作者: tank415 - 發表於 2010/04/29 11:05(14年前)

6^F推bluecsky:如果是泡在buffer中就還可以沒乾掉都還好乾掉就重做吧04/29 18:42

Re: western blot sample prepare

[ Biotech ]4 留言, 推噓總分: +1

作者: aggaci - 發表於 2010/04/27 21:00(14年前)

1^F推bluecsky:我也建議不要想隔夜做蛋白質的實驗最好能一路做到完04/28 07:19

2^F→bluecsky:最好把所有事情排開一天一次做到底不然重做會更幹04/28 07:20

3^F→bluecsky:還有如果真的想分兩天那還不如先不要破菌04/28 07:20

4^F→bluecsky:破菌後那些protease就跟者出來混成一團那就會很有趣...04/28 07:21

[閒聊] pipette 不轉回最大刻度會怎樣

[ Biotech ]26 留言, 推噓總分: +6

作者: higamanami - 發表於 2010/04/26 18:49(14年前)

15^F推bluecsky:column不洗有點誇張至少跑玩都要洗一下吧04/26 22:07

Re: [求救] 如何使重組蛋白變成soluble protein

[ Biotech ]20 留言, 推噓總分: +8

作者: sheepfeather - 發表於 2010/04/25 00:41(14年前)

13^F推bluecsky:refolding回去也不見得是原本的folding...04/26 18:34

14^F→bluecsky:能直接拿native protein是最好的選擇 refolding問題多04/26 18:34

15^F→bluecsky:只是拿native protein是很看運氣就是了04/26 18:35

21^F→bluecsky:沒辦法阿大家比較認可native form = 真正的folding04/27 19:00

22^F→bluecsky:所以搞蛋白純化才會這麼累不然要拿denature的簡單很多04/27 19:01

23^F→bluecsky:基本上只要能induction出來就可以有暴力解不管溶不溶04/27 19:02

[求救] 如何使重組蛋白變成soluble protein

[ Biotech ]10 留言, 推噓總分: +2

作者: what15 - 發表於 2010/04/24 19:30(14年前)

10^F推bluecsky:換vector基本上就是再換tag 或是換菌株04/24 22:58

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