[求救] 如何使重組蛋白變成soluble protein

看板Biotech作者 (小蛙)時間16年前 (2010/04/24 19:30), 編輯推噓2(2推 0噓 8→)
留言10則, 4人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
小妹目前在做重組蛋白的表現 使用的E.col為BL-21 vector為pET-20b 實驗到目前做的還蠻順利的 不過表現出來的蛋白會形成inclusion body 也有用denature buffer 純化出來 由於protein denature 後會影響protein activity 所以老闆希望我能想辦法讓recombinant protein直接變成 soluble 也就是維持它原有的蛋白質活性 ＝ ＝ 因此叫我try induction condiction 實驗室目前沒有人做過這一部份（通常都是直接玩denature/renature) 所以對於這個挑戰還蠻頭大的 小妹自己有查過資料 有些paper是說可加入chaperon 、heat shock protein或是換plasmid等等 但看起來都挺複雜的＠＠ 不曉得有沒有人做過類似的實驗或是有看過相關的paper（篇幅太大可寄站內信） 希望大家能幫小妹指點迷津 感謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.137.59.56
→
04/24 19:48, , 1F
如果不改序列的話 可以先從低溫培養開始抓條件看看
04/24 19:48, 1F
→
04/24 19:49, , 2F
16~20度(低溫) 25度(室溫) 誘導時間長短要抓抓看
04/24 19:49, 2F
→
04/24 20:56, , 3F
目前正在try低溫的條件 只是想問一下除了降低溫度
04/24 20:56, 3F
→
04/24 20:57, , 4F
shaker調慢 IPTG濃度降低的條件之外
04/24 20:57, 4F
→
04/24 20:57, , 5F
是否還有其他的辦法呢? (謝謝)
04/24 20:57, 5F
→
04/24 20:58, , 6F
另外請問一下 改序列的意思是?換vector?
04/24 20:58, 6F
→
04/24 21:23, , 7F
接一些soluble tag之類的 有的可以幫助提高水溶性
04/24 21:23, 7F
→
04/24 21:23, , 8F
或者是前面的signal peptide換成細菌的分泌蛋白
04/24 21:23, 8F
推
04/24 22:10, , 9F
換菌株比較快,多試幾種
04/24 22:10, 9F
推
04/24 22:58, , 10F
換vector基本上就是再換tag 或是換菌株
04/24 22:58, 10F
‣ 更多 what15 的文章
文章代碼(AID): #1BqjPA1c (Biotech)
‣ 更多 what15 的文章
文章代碼(AID): #1BqjPA1c (Biotech)