[求救] DNA電泳

看板Biotech作者 (GOD)時間13年前 (2010/10/01 11:04), 編輯推噓4(4014)
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最近在跑DNA電泳時出現了一些問題 1.同時做出來的膠片,有些跑完電泳後(20~25mins),大約在500bp會出現凹陷 沒錯,肉眼觀察就可以看到的凹陷,拿去照膠,果然500bp以下的DNA都不見了 有人說這是膠沒有均勻,或是沒有全溶的結果,可是我都有用stir去轉 也都會確認有沒有剩下沒溶的gel。 請問,有什麼原因會造成這情形? 2.DNA片段大小與marker對不起來 比如說我的基因大小1695bp,跟100bp marker比對卻是在1200bp的位置 後來發現,我用另一罐loading dye就正常了! loading dye一片膠都是用同一管,照理來說相同大小會跑在相同位置 各位有任何線索嗎?我不懂為什麼會這樣。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.121.200.179

10/01 11:21, , 1F
你用多少伏特去跑? 電壓太高有時候膠會溶解
10/01 11:21, 1F

10/01 11:26, , 2F
sorry 忘了說是用100volt跑的 0.8%gel,以前跑都沒問題
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10/01 11:27, , 3F
一直到最近才出現膠跑一跑溶掉的情況,溶掉的形狀是一條上
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下曲折的線
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10/01 11:34, , 5F
八成是buffer的問題,重配吧!
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10/01 12:23, , 6F
推樓上,上次我也泡錯,TRIS和EDTA都弄錯, 膠也溶了
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10/01 12:43, , 7F
Tris 108g
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boric acid 55g
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EDTA(0.5M pH8.0) 40ml
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10/01 12:45, , 10F
add H2O to 2L 5Xbuffer
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10/01 12:47, , 11F
弄錯是怎麼個弄錯法,我應該不會加錯吧 阿阿阿阿
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10/01 16:05, , 12F
固定電壓,若buffer離子濃度改變,造成電阻變小,電流會變強
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導致過熱,膠就熔了. 會造成離子改變的原因只有兩個,
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10/01 16:06, , 14F
1是配錯溶液,2是溶液用太久,濃度已改變.
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我說的溶液用太久,是說tank裡的TBE都沒換,卻跑了很多片膠
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我懂,V=IR P=IV 電流上升,功率增加,產熱也增加
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10/01 18:06, , 17F
這樣的話我是不是可以配成0.4X TBE 試試?
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10/01 19:56, , 18F
500bp 可以用TAE Buffer吧 離子濃度比較低!
10/01 19:56, 18F
文章代碼(AID): #1CfK_0E4 (Biotech)
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