Re: [求救] DNA電泳
※ 引述《chl20020933 (chl20020933)》之銘言：
: ※ 引述《yashi (我要天天快樂快樂)》之銘言：
: 昨天看到已經很晚了 所以到現在才回
: : 先謝謝很多人願意幫我一起釐清問題
: : 其實我個人比較傾向是buffer或是sample的問題哎
: 同s大表示 如果是這些問題 你的marker不會那麼清楚
: : 因為我這個實驗重覆滿多次了
: : 條件都是一樣的 1%的膠100V跑40min
: : 不過之前都沒有這方面的問題
: : 而且這次的sample是real-time完的產物
: : 而我同時也有跑melting curve
: : melting是一個很漂亮的peak
: 這我沒有做很多
: 不確定real-time偵測到的螢光 比實際的"specific" PCR product是不是絕對正確
: 也不知道是不是這原因 你們老師才要求你要跑GE
我們老師只覺得用melting curve看不出來 分子量
而且他喜歡"眼見為憑"的感覺
: 但是gel圖看起來 不知道是背景 還是non-specific 的smear
嗯嗯 這點我也不確定是產物本身就不專一 還是膠讓它smear
不過我還滿相信melting curve的
: : 我p完的產物放在-20℃冰箱三天我就跑了
: : PCR的program也不太可能有人動到…
: : 因為我們實驗室就只有我瘋狂的在跑real-time PCR
: : agrose我也都用一樣的
: : 附帶一題
: : 我的這個照片是用 切膠片用的光箱+數位相機+濾鏡照出來的
: : 所以可能照片跟照膠器照出來的 品質會差很多0rz...
: : 還有我不太了解 所謂的well裡面卡住的是template DNA是什麼意思…？？
: : 是代表我的template DNA加太多 所以反應不完全嗎？
: 我會說template DNA卡在那邊 因為看你的marker應該是100bp-3k的吧
: 所以上面殘留的大小 應該是template DNA才對
: 然後看染色的結果 相對來說 背景那麼強 只有60bp的 band一定會看不到
: 另外 你的gel只有1% 以往我們要分50-500bp的band都用到3%的gel
可是我以前用相同條件跑
我覺得結果還ok哎！！
http://www.wretch.cc/album/show.php?i=yashihuang&b=17&f=1299448890&p=4
: 或是 5%的 poly-acrylamide gel
: 1%跑 60bp 跑到下面都糊掉了(你可以看marker的100bp)
: 片段又很小很難染色 所以什麼都看不到
: : 如果是這樣的話可以從real-time PCR的curve或是melting curve看出來嗎？
: : (我覺得如果template DNA很多的話 melting curve應該會很醜吧？？？)
: : 最後 謝謝大家努力幫我解決！！
謝謝^^
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