[求救] DNA電泳

看板Biotech作者 (我要天天快樂快樂)時間15年前 (2009/07/20 10:29), 編輯推噓7(7推 0噓 26→)
留言33則, 10人參與, 5年前最新討論串4/10 (看更多)
我是把real-time PCR做完的產物拿來跑電泳 取15μL的sample加上3μl的dye 這次跑出來的sample是β-actin 大小大概是60bp PCR跑了40個cycle 膠片是1%的agrose gel buffer都是1× TBE buffer 我之前也是照著這個條件跑 都有跑出結果來 不過最近幾次發現sample都卡在上面下不來… 但是marker卻分得滿漂亮的 現在根本不知道問題出在哪裡 覺得很苦惱… 希望板上有高手可以幫我解決 感激不盡！！！ http://www.wretch.cc/album/show.php?i=yashihuang&b=17&f=1299448889&p=3 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.23.86
推
07/20 10:48, , 1F
請問PCR產物的大小？
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07/20 11:45, , 2F
60bp
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07/20 11:46, , 3F
你的agarose是新買的嗎?
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嗯 是新買的
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07/20 11:47, , 5F
是不是換牌子? 注意agarose有分很多種
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…真的啊…我們家有二個牌子的…我用另一個試試好了 謝謝
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我這次用的是amresco的
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推
07/20 11:49, , 8F
你可以比較一下 兩罐有什麼地方不一樣..或是先前是用哪一
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種
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07/20 11:55, , 10F
其實我一直是用amresco的哎…
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推
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是喔 那可能就不是這個問題~
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agarose貨號一樣的話 也許就不是這個問題
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推
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可能要先確定有PCR出東西 或者你可以loading一個之前
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曾經可以看到的sample當作跑膠過程的positive control
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推
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marker不是跑的挺好的嗎 應該不是膠的問題吧
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check看看 跑PCR的program是不是跟以前一樣
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有時候被別人動過 自己都不知道
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可以試試看1.5%的跑跑看 cDNA最好不要放太久
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07/20 23:33, , 19F
real-time PCR是SYBR Green嗎?有跑Melting curve?同一對
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primers?確定有產物嗎?看看之前的反應跟現在的反應有哪
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些地方不同也許就能釐清問題，有時候全部reagents換新也
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可能改善，不然就去拜拜吧。
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推
07/21 02:09, , 23F
我曾經因為marker也跑的好好的 但是PCR產物全卡在well裡
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後來比較一下 發現agarose有點不一樣,所以我才會懷疑
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但是原po既然都說agarose都一樣,那就可以先排除了
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you should have positive control in your experiment
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Check your primers!!!
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推
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上面那個是你的template DNA吧 染色背景那麼強
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product只有60bp gel只有1% 不可能看到東西 根本不是
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product卡在上面
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m
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arker不是跑的挺 http://yofuk.com
01/03 16:57, 33F
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