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作者 mattmatt 在 PTT 全部看板的留言(推文), 共1262則

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[求救] cloning實驗做到digest gelpurificatio …

[ Biotech ]45 留言, 推噓總分: +4

作者: honeytea96 - 發表於 2010/08/08 00:58(15年前)

22^F推mattmatt:PCR效率看起來頗差..直接P genomic DNA嗎?template量?08/09 02:24

23^F→mattmatt:看能不能想辦法P多一點...但還是建議gryou大說的,08/09 02:25

24^F→mattmatt:先用TA cloning,放大片段再下去切,量多又純又可定序08/09 02:27

25^F→mattmatt:你的方法一開始PCR產物量就少了而過一次純化kit會少50%08/09 02:28

26^F→mattmatt:kit只用12ul elute雖然濃度會高一點但elute的總量會更少08/09 02:28

29^F→mattmatt:最後就會少到無法做後續08/09 02:30

30^F→mattmatt:可以PCR多個五六管一起load膠做Gel purification08/09 02:31

31^F→mattmatt:elute用35~40左右然後直接digestion 但ligation可能不08/09 02:32

33^F→mattmatt:適合RE的酵素還是純化比較好 (但量又會更少囧)08/09 02:33

[求救] Vector only 的 control 比 vector + i …

[ Biotech ]55 留言, 推噓總分: +12

作者: boblu - 發表於 2010/08/06 22:34(15年前)

7^F推mattmatt:請問double digest時間多久? 以及plasmid和RE的量?08/07 04:21

8^F→mattmatt:ligation的溫度?08/07 04:24

19^F推mattmatt:4ug 1uL RE切4小時有點不太夠..會有不完全切完的可能..08/07 17:59

20^F→mattmatt:減少plasmid的量&增加切的時間再試試看吧...切ON試試?08/07 18:01

[分享] 圖書館B1印名片

[ NTU ]5 留言, 推噓總分: +2

作者: mattmatt - 發表於 2010/08/06 04:10(15年前)

4^F→mattmatt:只能說圖書館不是附近最便宜的值不值得就靠大家比較了~08/07 02:24

5^F→mattmatt:雖然我沒挑紙的材質...但用的不差~08/07 02:28

[求救] Western 的 band 黏合 + 形狀不佳 (附圖)

[ Biotech ]5 留言, 推噓總分: +2

作者: goodfish700 - 發表於 2010/08/05 21:20(15年前)

3^F推mattmatt:同樓上,注意tris buf.是否有變質,pH是否正確08/07 04:15

4^F→mattmatt:也確認running buffer是否有問題,配方是不是正確08/07 04:16

5^F→mattmatt:還有sample dye是否有變質...建議全部重配比較快!08/07 04:16

[討論] 請問southern blot在hybridization用的方法？

[ Biotech ]11 留言, 推噓總分: +3

作者: sunnyforever - 發表於 2010/08/05 19:20(15年前)

7^F推mattmatt:太大張玻璃管塞不下只能用塑膠袋+封口機...08/07 04:40

8^F→mattmatt:或是找裝得下的塑膠盒做...只要buffer可以完全覆蓋08/07 04:41

9^F→mattmatt:又可以shake.容器沒有甚麼差不要揮發光就好~08/07 04:42

10^F→mattmatt:hy的方式你還是找protocol吧 southern不難..成功率滿高的08/07 04:42

[討論] 請問真菌所分泌的水解酵素為何不會切到他自己本身的細胞壁

[ Biotech ]6 留言, 推噓總分: +3

作者: kingtiger - 發表於 2010/08/05 15:36(15年前)

5^F推mattmatt:chitinase只是功能統稱..每種生物生產的酵素不盡相同..08/07 04:33

6^F→mattmatt:當然針對的受質也不一定相同 & 植物與真菌細胞壁結構不同08/07 04:33

Re: [討論] plate如何晾乾

[ Biotech ]9 留言, 推噓總分: +3

作者: toystore - 發表於 2010/08/05 13:51(15年前)

6^F推mattmatt:plate蓋子半開放再無菌操作台裡面開抽風關門08/07 04:11

7^F→mattmatt:吹10分鐘就ok! 有抗生素的plate更不用怕...08/07 04:12

8^F→mattmatt:但請確保你家的無菌操作台夠乾淨...08/07 04:13

[問題] 有人長打不到球點嗎

[ Volleyball ]44 留言, 推噓總分: +15

作者: makemakebb - 發表於 2010/07/20 23:43(15年前)

25^F推mattmatt:自拋自扣都打得到也壓得下去.但配舉球員就打不到怎麼辦XD07/21 02:26

[求救] His-tag protein 純化問題

[ Biotech ]29 留言, 推噓總分: +6

作者: relaxsleep - 發表於 2010/07/16 08:12(15年前)

18^F推mattmatt:pPICZaC.你應該是使用pichia表現收外泌蛋白吧07/22 13:10

19^F→mattmatt:感覺protein結合力太低...可能要檢查一下charging的藥劑07/22 13:12

20^F→mattmatt:還有濃縮的步驟蛋白是否lost掉..或沉澱...07/22 13:12

21^F→mattmatt:我是用Qiagen的 ni-nta agarose 不必charging07/22 13:14

22^F→mattmatt:但步驟建議binding的步驟是使用buffer懸浮agarose07/22 13:14

23^F→mattmatt:將agarose與蛋白溶液混合搖晃2hr~隔夜抓更多的his-07/22 13:16

24^F→mattmatt:可能比直接將蛋白液通colunm抓得更完全吧07/22 13:17

25^F→mattmatt:外泌的蛋白比胞內單純的多得到純的蛋白機會應該是好一點07/22 13:18

26^F→mattmatt:可以說明怎麼濃縮嗎?07/22 13:19

29^F推mattmatt:會不會plasmid序列有錯沒做出his tag阿....?08/07 04:54

[滑鼠] 請推薦筆電用有線滑鼠

[ Key_Mou_Pad ]10 留言, 推噓總分: +2

作者: mattmatt - 發表於 2010/07/13 16:54(15年前)

3^F→mattmatt:好像...太多鍵了XD07/13 17:51

9^F→mattmatt:感謝007大最接近的好像真的是這隻...07/16 03:23

10^F→mattmatt:但外型再簡潔有力些就更棒了...07/16 03:23

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