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作者 kshsdeck 在 PTT [ Biotech ] 看板的留言(推文), 共39則

限定看板：Biotech

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[求救] 小片段蛋白表現

[ Biotech ]20 留言, 推噓總分: +4

作者: XD7103 - 發表於 2014/02/11 12:14(12年前)

9^F→kshsdeck:真的表現不出來的話只能換vector 試試pET系列的tags02/11 17:23

[求救] 生物性泡沫

[ Biotech ]4 留言, 推噓總分: +3

作者: pqopq - 發表於 2012/12/19 12:58(13年前)

2^F推kshsdeck:冒到外面你那槽基本上就不是sterile了12/20 04:23

3^F→kshsdeck:同上加消泡劑可以跟Sigma買關鍵字:Antifoam Y-3012/20 04:26

[求救] 純化soluble protein時~在binding buffer可添加TitonX100?

[ Biotech ]26 留言, 推噓總分: +5

作者: ricebaby - 發表於 2010/05/31 18:35(16年前)

4^F→kshsdeck:binding buffer可以加10mM Imidazole05/31 22:14

5^F→kshsdeck:主要是靠wash這個步驟05/31 22:16

6^F→kshsdeck:wash buffer的Imidazole濃度05/31 22:16

7^F→kshsdeck:要看目標蛋白和雜蛋白與resin結合能力的差距05/31 22:16

8^F→kshsdeck:拉個gradient或是階層式的提高imidazole的濃度05/31 22:18

9^F→kshsdeck:看你目標蛋白和主要雜蛋白peak出來時,Imidazole的濃度05/31 22:18

10^F→kshsdeck:運氣好你要的蛋白結合力強,wash buffer濃度就可以提高05/31 22:20

11^F→kshsdeck:就可以盡量洗掉雜蛋白05/31 22:23

12^F→kshsdeck:一般來說,只用一根Ni-column,不容易拿到很pure的蛋白05/31 22:25

13^F→kshsdeck:purity和yeild兩者要取平衡點05/31 22:26

[討論] cell culture用的meduim量

[ Biotech ]50 留言, 推噓總分: +13

作者: sunnyforever - 發表於 2010/05/24 18:17(16年前)

32^F推kshsdeck:各種細胞用的medium濃度是固定的,提高濃度會改變滲透壓05/25 15:47

33^F→kshsdeck:只放薄薄的一層要考慮到蒸發的問題對濃度影響較大05/25 15:50

34^F→kshsdeck:一般在dish或flask裡養的細胞即使長滿養分都夠放好幾天05/25 15:52

35^F→kshsdeck:但要考慮細胞產生的代謝物和pH的下降05/25 15:53

36^F推kshsdeck:以上就是為什麼大家都行之有年的用8-10ml去養10cm dish05/25 15:59

37^F→kshsdeck:而不做一些奇奇怪怪的改變05/25 16:00

[求救] 請教關於BL21(DE3)pLysS破細胞的方法

[ Biotech ]18 留言, 推噓總分: +7

作者: ricebaby - 發表於 2010/05/17 20:59(16年前)

6^F推kshsdeck:sonication效果有限尤其是放大規模後05/17 23:31

7^F→kshsdeck:eppendorf打的破同樣條件在離心管不一定破的完全05/17 23:32

8^F→kshsdeck:french press效果會好很多05/17 23:33

9^F→kshsdeck:在小量的時候,就應該先拿去sonicate,確定蛋白可不可溶05/17 23:35

10^F→kshsdeck:小量induction確定蛋白可溶,再考慮是不是破菌方法不夠好05/17 23:37

11^F推kshsdeck:小量確定不溶的話,調整IPTG濃度,溫度,induction時O.D60005/17 23:41

12^F→kshsdeck:再不行就換vector和Host05/17 23:41

13^F推kshsdeck:補充一點如果是破菌的問題,又沒有辦法借到French press05/17 23:44

14^F→kshsdeck:可以先Freeze&Thaw幾次,或是加Lysozyme05/17 23:45

15^F→kshsdeck:這樣前處理完,就已經可以看到稠稠的DNA跑出來了05/17 23:47

[求救] 滅菌的問題~^^

[ Biotech ]16 留言, 推噓總分: +11

作者: gary1031 - 發表於 2009/11/01 23:55(16年前)

11^F推kshsdeck:之前滅過500g/1L 拿來餵E.coli用這種濃度不會焦11/02 19:10

[求救] Recombinant protein in insoluble form

[ Biotech ]15 留言, 推噓總分: +6

作者: egoweaver - 發表於 2009/04/22 18:26(17年前)

1^F推kshsdeck:蛋白表現的很多可能性都要試了才知道,蠻碰運氣的04/22 18:49

請問sodium azide這藥品功能

[ Biotech ]20 留言, 推噓總分: +10

作者: mournermind - 發表於 2009/02/27 19:06(17年前)

9^F推kshsdeck:sonicate完 40000g一小時上清液就是可溶性蛋白不用煮02/27 22:52

10^F推kshsdeck:NaN3放在抗體溶液中是為了保存防腐用,看目的,也有人不加02/27 23:05

[求救] 關於小分子蛋白的western blot

[ Biotech ]15 留言, 推噓總分: +9

作者: tsk - 發表於 2009/02/16 22:06(17年前)

13^F推kshsdeck:transfer過頭電流調小或時間縮短02/18 21:38

[求救] 幾個有關於Western的問題

[ Biotech ]31 留言, 推噓總分: +14

作者: piggylo - 發表於 2007/07/21 21:38(18年前)

5^F推kshsdeck:有些抗體不適合應用在某些樣品中07/21 22:56

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