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作者 musicman 在 PTT [ Biotech ] 看板的留言(推文), 共86則

限定看板：Biotech

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[求救] transformation

[ Biotech ]8 留言, 推噓總分: +3

作者: starjim - 發表於 2011/09/03 13:04(14年前)

8^F→musicman:1ul plasmid + 9ul QH2O --->RE digestion--->跑膠09/15 18:13

[求救] 想要請問從濾紙上回溶DNA, 為何transform後得不到conony?

[ Biotech ]9 留言, 推噓總分: +6

作者: goddogic - 發表於 2011/06/08 18:35(14年前)

6^F推musicman:自己再用樣的濃度製備一張,隔天自己transform一次看看囉06/08 19:52

7^F→musicman:如果你做的出來,就代表是對方的問題 (菌種,回溶...)06/08 19:52

[求救] Ligation一直接不出來...

[ Biotech ]29 留言, 推噓總分: +13

作者: flyhuman - 發表於 2011/05/06 12:29(14年前)

23^F推musicman:EcoRI切個1.5hr以上吧不會亂切啦, 大概load 2ug下去切05/06 23:06

[求救] 最近的ligation很難搞...有人有好建議嗎?

[ Biotech ]55 留言, 推噓總分: +17

作者: shenhsu - 發表於 2011/04/28 12:27(14年前)

2^F推musicman:你的insert都好長啊......其實光看這樣的內容不太能幫你04/28 14:18

3^F→musicman:建議什麼,少了很多資訊,許多實驗條件都沒講(不方便透漏則04/28 14:19

4^F→musicman:另當別論) 希望可以多一點有用的資訊好讓大家集思廣益04/28 14:19

8^F推musicman:如 insert : vector 的比例,反應溫度時間等等..04/28 14:40

12^F推musicman:blunt end ligation 本身就比較困難試試看 5:5:1 記得要04/28 14:56

13^F→musicman:做 control組04/28 14:56

14^F→musicman:第二組可能兩個vector自接的狀況會很嚴重,至少挑一個04/28 14:58

15^F→musicman:vector做一下CIP或SAP, 比例不要用1:104/28 15:00

16^F→musicman:第一組的 insert真的頗大,7k....有辦法拆成兩段嗎?04/28 15:02

18^F→musicman:抱歉,看錯~1.7K應該還好...04/28 15:07

Re: [求救] Ligation 一直無法成功

[ Biotech ]51 留言, 推噓總分: +13

作者: micocat - 發表於 2011/04/28 11:36(14年前)

4^F推musicman:其實應該換一隻手做看看XDDD04/28 12:01

Re: [求救] Ligation 一直無法成功

[ Biotech ]9 留言, 推噓總分: +4

作者: akongapple - 發表於 2011/04/27 18:39(14年前)

2^F推musicman:vector digestion 結束後,先過個column,把digestion的04/27 19:35

3^F→musicman:酵素跟buffer 清除一下,再去做CIP ,但這邊依然要懷疑做04/27 19:37

4^F→musicman:CIP的必要性,請問您CIP的條件? 可以的話做一組沒有CIP04/27 19:37

5^F→musicman:的ligation看看~說不定有意想不到的收穫04/27 19:38

6^F→musicman:insert的部分可以先做TA clone 再送定序看看正確性04/27 19:39

[求救] Ligation 一直無法成功

[ Biotech ]36 留言, 推噓總分: +13

作者: akongapple - 發表於 2011/04/27 16:06(14年前)

2^F推musicman:Insert:Vector 改成 4:1~5:1 另外,ligation的反應條件04/27 17:19

3^F→musicman:總反應體積改成 20ul, 在22度c反應2~3hr(NEB ligase) ,04/27 17:21

4^F→musicman:vector 的 CIP 則不一定要做,取10ul去做transformation04/27 17:23

5^F→musicman: 如果有跑膠的圖可以看比較好判斷~04/27 17:28

12^F→musicman:同 yap ,要做一組 vector only的control~04/27 18:34

[求救]internal control?

[ Biotech ]8 留言, 推噓總分: +4

作者: bibico - 發表於 2011/04/24 22:15(14年前)

6^F→musicman:唉~就是哪個CONTROL漂亮就放哪個啦~~04/25 07:36

[求救] Ligation前的CIP是必要的嗎？

[ Biotech ]12 留言, 推噓總分: +3

作者: dodomilk - 發表於 2011/04/19 18:04(14年前)

7^F推musicman:我自己經驗是兩端切位為同一酵素就做CIP04/19 23:15

8^F→musicman:如果我是原PO, EcoRI跟BamHI 我就直接ligation了04/19 23:16

[討論] transwell assay 與 wound healing assay的差異性

[ Biotech ]10 留言, 推噓總分: +3

作者: lingerl523 - 發表於 2011/02/16 18:04(15年前)

6^F推musicman:transwell (matrigel assay) =invision+migration 能力02/17 22:35

7^F→musicman:wound healing assay = migration only02/17 22:36

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