[求救] Ligation前的CIP是必要的嗎？

看板Biotech作者 (豆漿)時間13年前 (2011/04/19 18:04), 編輯推噓3(3推 0噓 9→)
留言12則, 8人參與, 最新討論串1/1
小弟這次作construct用的是EcoRI和BamHI，切出來是sticky end 比較特別的是，EcoRI切出來的AATT和BamHI切出來的GATC，有兩個bp是一樣的 實驗室的人都建議做vector的CIP，請問有沒有人用這兩種restriction enzyme 不做CIP，接下來的ligation也做得很順利的？ 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.40.39
推
04/19 18:16, , 1F
就算不做CIP當然也是做得出來
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04/19 18:17, , 2F
不過我的經驗是 加了CIP幾乎不會挑到self-ligation
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04/19 18:19, , 3F
所以我都會加 後續挑colony比較愉快
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04/19 21:44, , 4F
只要RE有切好成功率高 做CIP ligation效率較差
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04/19 22:03, , 5F
感想如i大 真的是有命中率高！
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推
04/19 22:24, , 6F
除非你都長不出菌落 不然作一下CIP會比較好挑
04/19 22:24, 6F
推
04/19 23:15, , 7F
我自己經驗是兩端切位為同一酵素就做CIP
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04/19 23:16, , 8F
如果我是原PO, EcoRI跟BamHI 我就直接ligation了
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04/20 21:37, , 9F
同樓上~不過我還是不沒做CIP XDDD
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04/21 14:18, , 10F
direct ligation不做CIP，Single cut做CIP，所以給原PO建
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04/21 14:18, , 11F
議直接ligation就好
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04/21 17:25, , 12F
感謝大家的意見
04/21 17:25, 12F
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