Re: [求救] colony PCR有P到 但定序無結果
※ 引述《pan7353 (要變成自己喜歡的模樣)》之銘言：
: 我想請問一下沒有 transform 的 E.coli 哪來的阿 它不會長在 LBA 上 所以用 LB 養嗎?
: 這個步驟是為了確認是不是 P 到 chromosome 嗎?
隨便放一點點（記得，真的要"一點點"!）transformation 用的
competent cell solution 在沒有抗生素的agar plate 上就能得到一堆
: 4.我最後一次定序 就是用兩端 M13 做 colony PCR 結果一樣非常詭異
: 有 p 到兩種片段 一種是預計大小的(快1000bp) 但是非常非常淡
: 另一種很粗很亮 但是不是預計大小的片段 比較小一點(600bp)
: 比我的insert(850bp)還小 但是又不到沒有 insert 那麼小 (200bp)
: 我把有 p 到 1000bp 的送定序 恩 還是空的
: 然後我把用M13 P到兩種不同片段的菌再用 insert 的 primer p一次
: 然後通通都有 850bp 的片段
這個描述聽起來就是colony 同時有兩種plasmid 的情況
（在假設那個1 kb 是正確product 而非non-specific product 的前提下）
只是我第一次聽到這種正常size 的clone 也能有這種現象
而且size相差這麼小，沒理由amplify 之後那個大的（也就是正確的）pladmid
就完全消失無蹤 （....好吧，我承認我覺得那只是non-specific product）
你的vector only 這麼容易出現
倒不如留意看看enzyme digestion 和 de-phosphorylation 過程有沒有做好
PCR 是個很sensitive 的反應，有時候一些雜訊也不要太鑽牛角尖了
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年 輕 的 旅 人 之 歌：
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執著的心，在暗地裡苦苦思索
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