[求救] colony PCR有P到 但定序無結果
不好意思 這個問題我其實已經問過一次了 但是還是沒有解決
我的 insert DNA 有 846bp(PCR 得到的)
放到 yT&A 的 TA cloning vector 中(用 TA clone 接)
藍白篩選了六個 colony 做 PCR 結果都有 specific 的片段(用insert DNA的primer P)
挑了四個 colony 送定序後 結果四個都沒有 insert DNA 的序列
(用 vector 上的 M13 定序)
甚至連當初做 colony PCR 的 primer 序列都沒有
我已經試過的方法
1.換 pGEMT system 其他一樣 無效(因為我懷疑 colony PCR P 到 vector 上其他序列)
2.定序結果我有試過互補和反轉的序列了 都一樣 定序結果只有 vector 序列
3.直接抽 plasmid 用RE切 結果顯示沒有插入任何片段
4.把當初 PCR 得到的 insert 片段直接送定序 結果是正確的序列
5.另外 我們實驗室有三個人做 cloning 都發生一樣的情況 就是 colony PCR 有 band
但定序回來都只剩下 vector 序列
抱歉 問題有點長 其實我的重點就是 為何colony PCR 可 P 到 定序卻無結果?
那麼 colony PCR 究竟 P 到了什麼東西勒?
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.79.56
推
04/04 12:26, , 1F
04/04 12:26, 1F
推
04/04 12:51, , 2F
04/04 12:51, 2F
推
04/05 19:59, , 3F
04/05 19:59, 3F
→
04/05 20:00, , 4F
04/05 20:00, 4F
討論串 (同標題文章)
以下文章回應了本文：
完整討論串 (本文為第 1 之 9 篇)：