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作者 bluecsky 在 PTT [ Biotech ] 看板的留言(推文), 共687則

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[求救] 有關microarray technology

[ Biotech ]8 留言, 推噓總分: +1

作者: amatrrosivi - 發表於 2010/06/21 14:23(14年前)

7^F推bluecsky:他可能是上什麼生物資訊資料庫blah blah的課程06/22 23:01

[求救] 想請問關於transfer大分子量protein

[ Biotech ]11 留言, 推噓總分: +6

作者: linsnow - 發表於 2010/06/20 01:01(14年前)

5^F推bluecsky:140KD感覺並不算很大阿把時間拉長一點還有你buffer是?06/20 09:44

6^F→bluecsky:個人操作的protein常常都是200kD+的 WB還沒什麼大問題06/20 09:44

[求救] ligation後 (重做的條件請各位先進給 …

[ Biotech ]74 留言, 推噓總分: +16

作者: syming - 發表於 2010/06/18 00:56(14年前)

9^F推bluecsky:太多了一般酵素來說只能佔總體積10% 你這明顯20%了06/18 03:39

10^F→bluecsky:請改成5:0.5:0.5:1:3 或是你可以拉大體積改loading量06/18 03:39

11^F→bluecsky:一般RE 酵素 0.5ul所帶的U數絕對可以完全切光一般mini06/18 03:40

12^F→bluecsky:prep出來約5ul體積中的DNA(假設你mini是回溶50or100ul)06/18 03:41

18^F推bluecsky:切一刀是比較準但是也要看你insert有多大吧06/18 11:16

20^F→bluecsky:要是你insert有1k以上 vector也沒有特別巨大06/18 11:17

21^F→bluecsky:那光是看supercoil大概就分得出來06/18 11:17

22^F→bluecsky:PCR template一般加入的量是不會看得出來不過如果是指06/18 11:18

23^F→bluecsky:單純的template 就要看你template load到gel的量有多少..06/18 11:18

28^F推bluecsky:沒切的跑膠並不會沒意義阿看你vector多大 insert多大06/18 16:48

29^F→bluecsky:例如3k->4.5k 在0.6% gel下其實supercoil就可以分的出來06/18 16:49

30^F→bluecsky:但是要是3k->3.5k 或是9k->12k之類這就很難分了06/18 16:49

31^F→bluecsky:單純看大小差異跟你跑得gel能給的解析度有關06/18 16:50

32^F→bluecsky:supercoil是會讓他泳動速度變快但是大的supercoil06/18 16:51

33^F→bluecsky:泳動還是比小的supercoil慢06/18 16:51

34^F推bluecsky:當然這只是單純看band shift看有沒有變化而已06/18 16:54

35^F→bluecsky:最準的還是要做RE digest來看最好可以找出insert特有06/18 16:54

36^F→bluecsky:的RE site來搭配這樣最好06/18 16:55

60^F推bluecsky:跟樓上一樣我vector都只拿1 insert都塞到爆 4度C o/n06/20 09:49

61^F→bluecsky:ligation buffer看要不要在拿一個新的確實滿容易壞的06/20 09:49

62^F→bluecsky:畢竟有些人操作習慣不太好 buffer拿了用完也不馬上冰好06/20 09:50

63^F→bluecsky:讓他一直放在室溫好一點的飄在融化的冰水中...06/20 09:50

64^F→bluecsky:這樣久了以後buffer很容易壞掉06/20 09:51

[求救] western疑問

[ Biotech ]16 留言, 推噓總分: +10

作者: chung1987 - 發表於 2010/06/13 22:18(14年前)

8^F推bluecsky:一般不建議時間用過久因為真的會過頭...06/14 16:30

[求救] 純化soluble protein時~在binding buffer可添加TitonX100?

[ Biotech ]26 留言, 推噓總分: +5

作者: ricebaby - 發表於 2010/05/31 18:35(14年前)

17^F推bluecsky:binding buffer加imidazole才比較不會bind雜蛋白吧..06/01 04:28

18^F→bluecsky:總之如上所說產率跟純度要自己依用途選擇06/01 04:29

19^F→bluecsky:一般這邊純化完後大多還會跑別的cloumn以求更純的蛋白06/01 04:30

[求救] 請教有做過sticky-end PCR的前輩

[ Biotech ]18 留言, 推噓總分: +6

作者: championelmo - 發表於 2010/05/31 16:56(14年前)

2^F推bluecsky:TE是保存方面比較好用水也可以兩者都用過05/31 18:05

8^F→bluecsky:可以把重新配對後的PCR product做PNK處理06/01 04:32

9^F→bluecsky:vector依然可以CIP處理要是你能確定vector切很好06/01 04:32

10^F→bluecsky:不CIP處理也沒什麼不好再來這方法比較麻煩一點在於06/01 04:33

11^F→bluecsky:其實重新混合後理論上大約只有1/4是你要的配對06/01 04:33

12^F→bluecsky:不過也就這1/4是有辦法ligation的只是加反應時自己要06/01 04:34

13^F→bluecsky:稍微注意一下量的比例06/01 04:34

15^F推bluecsky:還好耶我個人操作 vector有無CIP處理都可以做出來06/01 12:11

16^F→bluecsky:cloning拿到一個對的就好了拿一整盤也不會比較有用06/01 12:12

17^F→bluecsky:有時候長滿盤我還比較擔心..06/01 12:12

[情報] 德國研究機構博士班職缺(有薪水)proteo …

[ Biotech ]4 留言, 推噓總分: 0

作者: lockq - 發表於 2010/05/28 16:45(14年前)

1^F→bluecsky:之前跟某個德國教授談過他說他們那邊做post doc05/29 07:52

2^F→bluecsky:1/2錢去交稅 1/4錢去交房租 1/4錢拿來自己吃飯可能還不夠05/29 07:53

3^F→bluecsky:一想起來就有點囧..05/29 07:53

4^F→bluecsky:話說回來原來這篇不是在找post doc = =05/29 07:53

[求救] primer訂製出錯的可能性？

[ Biotech ]22 留言, 推噓總分: +8

作者: dodomilk - 發表於 2010/05/26 10:54(14年前)

19^F推bluecsky:本來就有可能出錯確定出錯的話就馬上打去叫他們重做05/27 07:28

[求救] 4題[遺傳學]題目請教 >"<

[ Biotech ]3 留言, 推噓總分: +2

作者: glabella - 發表於 2010/05/26 03:56(14年前)

1^F推bluecsky:第二題問得是"不是"組成的東西耶..DNA polymerase當然不05/26 05:45

2^F→bluecsky:第三題出得不好不過線索是A=T 所以在一般狀況下05/26 05:46

[請教]請問物理化學對生命科學領域知識的重要性

[ Biotech ]24 留言, 推噓總分: +9

作者: jackal0427 - 發表於 2010/05/25 01:56(14年前)

7^F推bluecsky:物理化學也算很重要的概念假如後來想走生物物理方面研究05/25 17:29

8^F→bluecsky:或是走生物材料方面的我是覺得多修一點並沒有不好05/25 17:29

9^F→bluecsky:有一些概念存在也好例如酵素動力方面的概念05/25 17:30

10^F→bluecsky:或是一些結構上的概念這些我記得都是物化相關的05/25 17:31

11^F→bluecsky:雖然妳現在決定將來是走細胞生理不過誰知道未來呢?05/25 17:31

17^F推bluecsky:要說基本概念的東西生物怎麼樣都脫離不了物理化學05/25 18:57

18^F→bluecsky:各種化學大概除了無機之外生物基本上都用得到05/25 18:57

19^F→bluecsky:至少概念跟基本原理上是有用到的只是很多時後05/25 18:58

20^F→bluecsky:大家都是拿者一份操作流程就矇者頭做下去管他原理是啥05/25 18:58

21^F→bluecsky:不過要成為真的精通的人我還滿少看過這些觀念不好卻精通05/25 18:59

22^F→bluecsky:的人存在大多數強的人是連基礎都很強的05/25 18:59

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