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作者 bluecsky 在 PTT [ Biotech ] 看板的留言(推文), 共687則

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[問題]GST純化的resin

[ Biotech ]13 留言, 推噓總分: +4

作者: sarahls - 發表於 2010/08/09 23:26(13年前)

10^F推bluecsky:是有洗的這麼不乾淨嗎囧再說你一般存resin的條件下08/11 03:35

11^F→bluecsky:蛋白也不會stable到哪去而且大多不會一個tag就拿到純的08/11 03:35

12^F→bluecsky:大不了同一種蛋白就一直重複用那一批resin 不夠再拿新的08/11 03:35

13^F→bluecsky:補一點有做好wash跟regeneration 可以用很久的08/11 03:36

[求救] Vector only 的 control 比 vector + i …

[ Biotech ]55 留言, 推噓總分: +12

作者: boblu - 發表於 2010/08/06 22:34(13年前)

29^F推bluecsky:你挑出來失敗的產物是比較像是self-ligation的嗎?08/08 07:51

30^F→bluecsky:如果挑了10個都沒拿到那可以考慮重做一批試試看08/08 07:51

31^F→bluecsky:我覺得可能是enzyme digest跟CIP都沒完全造成的08/08 07:51

32^F→bluecsky:你或許可以嘗試一下讓digest時間拉長 CIP時間1hr夠了08/08 07:53

33^F→bluecsky:只怕CIP是失去了活性不過理論上兩刀應該不cip也沒差08/08 07:54

34^F→bluecsky:大多的時候 vector only是可能會長不過量非常少就是了08/08 07:56

35^F→bluecsky:對了你有分別單獨用兩種enzyme去試者切你的vector嗎?08/08 07:56

36^F→bluecsky:說不定有一刀根本沒有但是你看不出來??08/08 07:57

37^F推bluecsky:有時候是vector根本就是錯的或是壞的這也是遇過08/08 12:42

38^F→bluecsky:另外常見的錯誤有:1.plate抗生素壞了或是濃度錯了08/08 12:42

39^F→bluecsky:所以你可以嘗試看看直接塗competent cell上去會不會長08/08 12:43

40^F→bluecsky:或是2.操作的器具有汙染不過這種colony會很明顯不是08/08 12:44

41^F→bluecsky:基本上這些都遇過但是不保證真的有發生在你那邊..08/08 12:45

51^F推bluecsky:找特異性序列或是重新從最初的stock拿來用..08/08 18:13

Re: [求救] 還是改問細胞相關好了

[ Biotech ]10 留言, 推噓總分: +5

作者: boblu - 發表於 2010/08/06 02:28(13年前)

2^F推bluecsky:數位放大到最後就是看一堆馬賽克而已..08/06 10:10

Re: [求救] 請問關於3600倍顯微鏡

[ Biotech ]10 留言, 推噓總分: +4

作者: boblu - 發表於 2010/08/04 04:20(13年前)

7^F推bluecsky:我猜是光學+數位放大最終可以得到3600X 這樣的倍率08/05 15:25

8^F→bluecsky:所以原本的顯微鏡大概是1000多倍左右吧滿合理的08/05 15:26

9^F→bluecsky:不然純光學就到3600X..有這種神等級的東西嗎囧08/05 15:26

[求救]我剛考上清華大學生物科技研究所博士班

[ Biotech ]16 留言, 推噓總分: +8

作者: alfred0929 - 發表於 2010/07/26 16:12(14年前)

9^F推bluecsky:比較想知道你原本是哪裡的?連一點關係認知都沒有就讀博班07/26 21:42

10^F→bluecsky:說實在你也十分的強悍某種意義上來說..07/26 21:43

[求救] 不是做ip 卻染出heavy and light chain

[ Biotech ]19 留言, 推噓總分: +1

作者: FENOR - 發表於 2010/07/18 23:52(14年前)

13^F→bluecsky:我也滿好奇你怎麼確定是HC LC..單看WB位置不能篤定吧07/19 06:55

[討論] 為什麼phusion protein的hia tag有時在N端有時在C端????

[ Biotech ]8 留言, 推噓總分: +2

作者: takumatw - 發表於 2010/07/17 17:49(14年前)

1^F推bluecsky:理論上如果蛋白很穩定又不會有包埋的問題 N跟C都可以07/17 18:42

2^F→bluecsky:但是每個蛋白狀況不同有的在N端容易先分解有的則是可能07/17 18:43

3^F→bluecsky:會把某一端包在結構中這樣在純化上就要去嘗試條件07/17 18:43

4^F→bluecsky:是說你標題應該是指His tag吧因為我不知道hia tag是啥07/17 18:44

[求救] His-tag protein 純化問題

[ Biotech ]29 留言, 推噓總分: +6

作者: relaxsleep - 發表於 2010/07/16 08:12(14年前)

13^F推bluecsky:單用his-tag要抓到很純的蛋白大概命要很好(遠望)07/16 19:21

[求救] 請問GFP表達?

[ Biotech ]8 留言, 推噓總分: +5

作者: hshinyi - 發表於 2010/07/08 00:37(14年前)

7^F推bluecsky:有"可能"會比較亮但是只是有"可能"07/09 06:39

[求救] 又有問題了= =

[ Biotech ]29 留言, 推噓總分: +8

作者: amatrrosivi - 發表於 2010/06/21 15:28(14年前)

18^F推bluecsky:open computer 那你不會用google???06/22 17:35

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