[求救] 不是做ip 卻染出heavy and light chain

看板Biotech作者 (FENOR)時間14年前 (2010/07/18 23:52), 編輯推噓1(1推 0噓 18→)
留言19則, 6人參與, 最新討論串1/1
小弟用的vector是pcDNA4A/TO/myc-his 然後我把目標的BirA gene insert進去後，transfect到293T內進行表現。 接著用了anti-myc的抗體進行一抗，最後進行了成色 然後問題來了:明明不是做IP，可是卻染出了heavy chain和light chain， 然後目標的蛋白卻毫無表現，該怎麼解釋@@ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.135.172 ※ 編輯: FENOR 來自: 140.112.135.172 (07/18 23:52)
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07/19 00:12, , 1F
anti-myc怎會抓heavy chain和light chain?
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07/19 00:13, , 2F
假設你是做Western blot, sample裡也沒抗體吧
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既然沒抗體的話,從哪判斷是heavy chain和light chain?
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還是說把background認成什麼東西了
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07/19 00:23, , 5F
是對著marker看的，兩條剛好是在56KD和1XKD的位置
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然後目標是在37KD 可是卻甚麼都沒有
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另外作的空VECTOR控制組也染到了一樣的東西
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所以疑似heavy chain和light chain的東西是被二抗亂認嗎?
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單獨染二抗的話 還會出現這兩條嗎
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推
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56附近那個應該是內生性的myc 不會平白無故生出HC LC
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出來.再者293T是隨便送隨便做就一堆..先確定你的
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plasmid序列都對..接著確認送的方法的確送的進去
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07/19 06:55, , 13F
我也滿好奇你怎麼確定是HC LC..單看WB位置不能篤定吧
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07/19 10:28, , 14F
我確定過全部是in frame的，也是正確的東西= ="
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我以前染myc,也會染到很強的background,一樣也是293T
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07/19 12:07, , 16F
但怎麼樣也都不會覺得是hc跟lc,
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07/19 12:07, , 17F
而且,一般的二抗不會一起認到HC跟LC...
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07/20 10:18, , 18F
今天會重做一個沒有任何transfect的@@看看是不是內生的myc
07/20 10:18, 18F
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07/22 12:44, , 19F
我覺得 myc 抗體很弱~ 既然有his 換個抗體抓抓看~
07/22 12:44, 19F
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