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作者 akongapple 在 PTT 全部看板的留言(推文), 共70則

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[分享] 獨一無二的結婚紀念禮物袖珍屋盒

[ GetMarry ]127 留言, 推噓總分: +125

作者: swaysway618 - 發表於 2014/01/28 22:28(10年前)

122^F推akongapple:想知道廠商資訊及價格還有製作時間，謝謝您05/02 20:44

[負雷] 期待過剩的鋼鐵超人

[ movie ]220 留言, 推噓總分: +30

作者: jacky66666 - 發表於 2013/06/17 22:46(11年前)

125^F推akongapple:的確不是從小到大所看到和想像中的超人06/18 10:30

[問題] Smallville & MOS 與原著superman的差異?

[ Superman ]108 留言, 推噓總分: +20

作者: whps5608 - 發表於 2013/06/17 16:34(11年前)

61^F推akongapple:SV真的影響太深了，看完電影真的失落感蠻重的，特別是06/18 10:05

62^F→akongapple:養父，我覺得再怎麼樣絕對都不可能叫CK不要去救人，06/18 10:05

63^F→akongapple:SV裡真的有感受到養父母的偉大，而且在龍捲風那段，06/18 10:05

64^F→akongapple:如果是在SV裡面CK一定是瞬移過去根本不會有人發現。06/18 10:05

Re: [吐雷] 鋼鐵超人不得不吐的理由

[ movie ]79 留言, 推噓總分: +21

作者: Handway - 發表於 2013/06/14 13:34(11年前)

48^F推akongapple:看過 smallville 以後真的很難接受電影版演成這樣06/14 15:26

[求救] His-tag protein 純化無法binding

[ Biotech ]11 留言, 推噓總分: +2

作者: diffa2 - 發表於 2011/10/07 20:34(12年前)

8^F→akongapple:我之前遇到和你一樣的問題，後來我更改了buffer的pH值12/20 10:52

9^F→akongapple:後，protein binding 量大增，flow-through幾乎看不到12/20 10:52

10^F→akongapple:signal，我把pH值從8.0調到9.5，另外我用的是0.5MCuSO412/20 10:54

11^F→akongapple:我要純化的是 EGFP protein12/20 10:54

[DIY ] 手工卡片音樂盒

[ gift ]5 留言, 推噓總分: +5

作者: shiuanempero - 發表於 2011/09/18 00:50(12年前)

3^F推akongapple:你做的禮物很棒耶請問電池電線LED錄放音機要去哪買阿11/03 23:02

[求救] His-tagged protein 純化方法

[ Biotech ]7 留言, 推噓總分: +2

作者: akongapple - 發表於 2011/08/18 13:53(12年前)

3^F→akongapple:sample是bacterial lysates離心後的上清液08/20 10:44

4^F→akongapple:lysis buffer是20mM NaH2PO4和20mM K2HPO4 pH7.208/20 10:44

Re: [求救] Ligation 一直無法成功

[ Biotech ]51 留言, 推噓總分: +13

作者: micocat - 發表於 2011/04/28 11:36(13年前)

13^F推akongapple:不好意思，這邊補充一下，目測的話應該有>100顆，只是04/29 11:14

14^F→akongapple:我講得比較保守，所以打>50顆，因為我也沒實際去數04/29 11:14

15^F→akongapple:另外competent cells是commercial的04/29 11:15

19^F推akongapple:所以說positive control沒長很多的話代表ligation會長04/29 17:57

20^F→akongapple:不出來嗎？我大概都取20ng左右的plasmid去transform04/29 17:58

21^F→akongapple:competent cells用50 uL，加SOC medium恢復1 hr後04/29 17:59

22^F→akongapple:取300 uL塗盤，不過我在想positive control的數量只是04/29 18:00

23^F→akongapple:參考，ligation如果有成功就一定會長出來吧！還是我的04/29 18:00

24^F→akongapple:認知錯誤了？04/29 18:00

35^F推akongapple:所以說因為有成功ligation的plasmid amount很少很少，04/29 19:48

36^F→akongapple:所以如果連positive control都長很少，更何況量少到在04/29 19:49

37^F→akongapple:膠上都看不出來的正確ligation產物，請問樓上是這個意04/29 19:49

38^F→akongapple:思嗎？如果有誤解請更正我，謝謝。04/29 19:50

39^F→akongapple:另外我在想，因為我在transformation的時候，為了省04/29 19:50

40^F→akongapple:competent cells，都會先等它完全溶解後，再從原本的04/29 19:51

41^F→akongapple:一管100uL分裝50uL到另一管，再進行transformation，04/29 19:51

42^F→akongapple:會不會是因此而降低了efficiency？04/29 19:52

43^F→akongapple:可是我還是認為如果有正確ligation的話，就算量再少，04/29 19:52

44^F→akongapple:也足以讓E. coli長出來吧！04/29 19:52

Re: [求救] Ligation 一直無法成功

[ Biotech ]20 留言, 推噓總分: +7

作者: dodomilk - 發表於 2011/04/28 02:50(13年前)

5^F推akongapple:請問你的clean up步驟是指做甚麼樣的處理？04/28 08:01

6^F→akongapple:另外，我記得有作CIP的話，一樣會形成環型，只是因為只04/28 08:01

7^F→akongapple:將insert的5' phosphate group接到vector的3' -OH，但04/28 08:02

8^F→akongapple:是vector上沒有5'phosphate group，所以會留有一個nick04/28 08:03

9^F→akongapple:送進E. coli後才會把這個nick補起來。04/28 08:03

Re: [求救] Ligation 一直無法成功

[ Biotech ]9 留言, 推噓總分: +4

作者: akongapple - 發表於 2011/04/27 18:39(13年前)

8^F→akongapple:那我就先試試看不加CIP處理去做ligation吧！謝謝囉!04/27 23:15

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