Re: [求救] cloning 救郎喔~~
※ 引述《bluehttp (蝦毀)》之銘言：
: ※ 引述《wensing (潛力股)》之銘言：
: : 1. 切的時候 是一起混切？ 還是先後切？
: : 2. 切完後 再經膠體純化後，DNA sample 是否還在？
: : 3. ligation時，大小片段混合後，加入buffer前是否先45℃加熱再冰浴？
: ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^
: 這一步是為什麼? 完全不懂
: : 全程是否冰浴操作？有沒有再額外加入1mM ATP? 大小片段混合比例是否正確？
: : (po 一下 你的步驟)
: 1.Hind III 及Xho I 一起切, 37度 overnight
: 2.run gel,gel extraction (bioman)
: (在gel extraction後,我有跑電泳,確定DNA還在)
^^^^^^^^^^^^^^
如果有切膠純化 DNA 盡量不要照UV照太久 如果DNA damage 可能也會影響ligation
: 3.ligation,體積比insert/vector = 7:1
: (我用的ligation buffer本身就含有 1mM ATP)
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※ 編輯: kohigh 來自: 140.112.212.239 (12/13 02:28)
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