[求救] cloning 救郎喔~~

看板Biotech作者 (蝦毀)時間16年前 (2007/12/12 01:17), 編輯推噓4(402)
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最近在做cloning, 做到快發瘋了. 我用 XhoI 及 Hind III (biolabs), 去切 insert 和 vector, 跑電泳也確定有切動, 之後用T4 DNA ligase 進行 ligation, 然後overnight, 隔天再transform (DH5a),recovery 1hr,塗plate, overnight. 可是隔天來看沒有長..... 我有試過用 fermentas 的 ligase 及 biolabs 的 ligase, 可是一樣都沒長, 不知道尚有哪些細節我沒注意到, 希望有經驗的大大可以幫助我阿! -- 花這麼多時間作實驗 一樣 "no data" 林北黑掉了..........凸>"<凸 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.192.24.108

12/12 01:21, , 1F
抗生素的比例是否過高?
12/12 01:21, 1F

12/12 01:24, , 2F
amp 60ug/ml 且我有用沒切的plasmid做transform有長
12/12 01:24, 2F

12/12 12:31, , 3F
ligation condition? temp?
12/12 12:31, 3F

12/12 13:34, , 4F
可以試試看ligationn三天...應該就會長幾顆了...
12/12 13:34, 4F

12/12 13:44, , 5F
可以問…transform完的菌液有全部塗完嗎?
12/12 13:44, 5F

12/12 19:52, , 6F
ligation 有試過 16度和室溫
12/12 19:52, 6F
文章代碼(AID): #17NiOgVE (Biotech)
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