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討論串[求救] cloning 救郎喔~~
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#7
Re: [求救] cloning 救郎喔~~
推噓5(5推 0噓 1→)留言6則，0人參與, 最新作者greenmoon00 (蒼天之月)時間18年前 (2007/12/13 17:56), 編輯資訊
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XhoI跟HindIII是可以合切的 用2號的樣子 雖然我是比較喜歡先後切. 切完後膠回收 然後膠回收的產物回溶後取等量下去跑一片膠. 再依band的亮度決定ligation的vector:insert. 我習慣是.... vector跟insert的亮度去除以長度得到莫耳比 vector:inse
(還有376個字)
#6
Re: [求救] cloning 救郎喔~~
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者kohigh (習慣)時間18年前 (2007/12/13 02:26), 編輯資訊
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^^^^^^^^^^^^^^. 如果有切膠純化 DNA 盡量不要照UV照太久 如果DNA damage 可能也會影響ligation--. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 140.112.212.239. ※ 編輯: kohigh 來自: 140.112.212.239
#5
Re: [求救] cloning 救郎喔~~
推噓4(4推 0噓 1→)留言5則，0人參與, 最新作者cothuho (cothuho)時間18年前 (2007/12/12 13:41), 編輯資訊
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你的insertion 和vector長度比如何？. 長度接近 且insertion較長時 也比較難ligate. 另外 你的vector有沒有放夠量. 至少也要100ng 比較保險. 別只看膠上跑的粗細來判定 去測測濃度吧. DH5a細胞數不要太高 會影響transformation. 若要塗的細
#4
Re: [求救] cloning 救郎喔~~
推噓4(4推 0噓 1→)留言5則，0人參與, 最新作者bluehttp (蝦毀)時間18年前 (2007/12/12 10:23), 編輯資訊
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^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^. 這一步是為什麼? 完全不懂. 1.Hind III 及Xho I 一起切, 37度 overnight. 2.run gel,gel extraction (bioman). (在gel extraction後,我有跑電泳,確定DN
#3
Re: [求救] cloning 救郎喔~~
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者wensing (潛力股)時間18年前 (2007/12/12 02:30), 編輯資訊
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1. 切的時候 是一起混切？ 還是先後切？. 2. 切完後 再經膠體純化後，DNA sample 是否還在？. 3. ligation時，大小片段混合後，加入buffer前是否先45℃加熱再冰浴？. 全程是否冰浴操作？有沒有再額外加入1mM ATP? 大小片段混合比例是否正確？. (po 一下 你的
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