Re: [求救] 怎麼做都做不出來..............
※ 引述《ppta (幸福的瞬間)》之銘言：
: 有三個基因我做了好久，只有偶而才做得出來，大多完全做不出來喔，麻煩各位高手指點我
: 一下，這三個基因包含後來做的兩個基因，我的試劑配法均如下：
: dna 3（未定量）、buffer 2.5入 primer（10 pmol/入）各2.5入 dntp（2.5mM）4入
: 、taq（5u/入）0.5入，水10入。
: 而且因為一直做不出來我還學版友把40cycle的程式均改成1分三十秒還是沒東西
: drd3曾經做出來過，用的primer是寒假時訂的。程式如下：
: 95 6分，94 1分 55 30s 72 45秒 共跑40cycle， 72度10分，annealing溫度後來我降
: 成50度還是沒東西。但是50跟55度我都曾經跑出過東西來。paper寫的annealing溫是55度
: a218c
: 94度四分，94度30秒、50度30秒（後來也有改過59度、56度、53度，56、53度均有跑出過
: 東西）、72度1分，共40cycle、72度10分。paper寫的 annealing溫是55度。有嘗試將
: dna含量調成5入及1入，但仍沒東西。
: serotonin transporter
: 94度5分、94度30秒、63度30秒（後來改成50、55度還是跑不出來）、72度30秒、共40cycle，
: 72度5分，之前63度時曾經跑出很亮的band，但現在..........paper寫的 annealing是
: 63度至55度間。
: 這三個基因是我寒假做的，大多做不出來，偶而才做得出很弱的band，但我後來訂的兩個
: 新基因，用一樣的材料一下子就成功了，也是用annealing溫50度做，其中一個比較不亮，
: 打算提高一下溫度，另一個則超亮的。
: 現在我只想到還沒嘗試拿別人的試劑來試，其他想不到了，高手們能不能救救我。
自問自答好了，現在我終於找出原因了，原來問題出在dna身上，現在找出問題我不知道
該哭還是該笑，高興的是總算找出原因，但難過的是我為了這個無聊的原因浪費了兩個月
。如果我不要太害怕跟老師溝通，都悶著問實驗室的同學，我想我現在應該口試完畢了吧。
就在所有方法都試遍後，只好老師地跟老師溝通，老師拿了十五個三、四年前萃取的dna，
他說他萃得很好，叫我拿去與我用來做實驗的dna用0.7%的gel跑跑看，竟然發現我的dna
似乎沒東西。所以我拿老師給我的dna來做實驗，一次就做出來了，還有雜band呢，天啊。
想要節省麻煩，懶得泡0.7%的膠來跑，總是覺得曾經p出來過，所以一直覺得是條件及基因
太難做的問題，結果造成更多的麻煩。雖然真的曾p出來過，而且很微弱，再加上學弟給的
dna是他最近萃而且p出來很亮的，但總之就是不大好用就是了。
雖然這課學得有點晚，但是以後跑pcr前，一定要先確認dna的濃度啊，即使沒有定量的設
備，也要先跑一下gel啊。
搞笑了，雖然我笑不出來。不過，真的謝謝這段時間給我建議的各位高手，謝謝。
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