Re: [求救] 怎麼做都做不出來..............
※ 引述《ppta (幸福的瞬間)》之銘言：
: 有三個基因我做了好久，只有偶而才做得出來，大多完全做不出來喔，麻煩各位高手指點我
: 一下，這三個基因包含後來做的兩個基因，我的試劑配法均如下：
: dna 3（未定量）、buffer 2.5入 primer（10 pmol/入）各2.5入 dntp（2.5mM）4入
: 、taq（5u/入）0.5入，水10入。
: 而且因為一直做不出來我還學版友把40cycle的程式均改成1分三十秒還是沒東西
: drd3曾經做出來過，用的primer是寒假時訂的。程式如下：
: 95 6分，94 1分 55 30s 72 45秒 共跑40cycle， 72度10分，annealing溫度後來我降
: 成50度還是沒東西。但是50跟55度我都曾經跑出過東西來。paper寫的annealing溫是55度
: a218c
: 94度四分，94度30秒、50度30秒（後來也有改過59度、56度、53度，56、53度均有跑出過
: 東西）、72度1分，共40cycle、72度10分。paper寫的 annealing溫是55度。有嘗試將
: dna含量調成5入及1入，但仍沒東西。
: serotonin transporter
: 94度5分、94度30秒、63度30秒（後來改成50、55度還是跑不出來）、72度30秒、共40cycle，
: 72度5分，之前63度時曾經跑出很亮的band，但現在..........paper寫的 annealing是
: 63度至55度間。
: 這三個基因是我寒假做的，大多做不出來，偶而才做得出很弱的band，但我後來訂的兩個
: 新基因，用一樣的材料一下子就成功了，也是用annealing溫50度做，其中一個比較不亮，
: 打算提高一下溫度，另一個則超亮的。
: 現在我只想到還沒嘗試拿別人的試劑來試，其他想不到了，高手們能不能救救我。
請問annealing溫度最低能降到多少啊，是不是低一定做得出東西（就是說低做不出來，
高一定也做不出來，純就annealing溫來考量，假設其他條件是正確的話），能不能告訴
我一下最低的annealing溫，我想直接衝一下最低的annealing溫，把這個條件固定住，再
來改其他的條件。有雜band沒關係，天知道我多想看一看雜band來改進啊。
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