[求救] 怎麼做都做不出來..............
有三個基因我做了好久,只有偶而才做得出來,大多完全做不出來喔,麻煩各位高手指點我
一下,這三個基因包含後來做的兩個基因,我的試劑配法均如下:
dna 3(未定量)、buffer 2.5入 primer(10 pmol/入)各2.5入 dntp(2.5mM)4入
、taq(5u/入)0.5入,水10入。
而且因為一直做不出來我還學版友把40cycle的程式均改成1分三十秒還是沒東西
drd3曾經做出來過,用的primer是寒假時訂的。程式如下:
95 6分,94 1分 55 30s 72 45秒 共跑40cycle, 72度10分,annealing溫度後來我降
成50度還是沒東西。但是50跟55度我都曾經跑出過東西來。paper寫的annealing溫是55度
a218c
94度四分,94度30秒、50度30秒(後來也有改過59度、56度、53度,56、53度均有跑出過
東西)、72度1分,共40cycle、72度10分。paper寫的 annealing溫是55度。有嘗試將
dna含量調成5入及1入,但仍沒東西。
serotonin transporter
94度5分、94度30秒、63度30秒(後來改成50、55度還是跑不出來)、72度30秒、共40cycle,
72度5分,之前63度時曾經跑出很亮的band,但現在..........paper寫的 annealing是
63度至55度間。
這三個基因是我寒假做的,大多做不出來,偶而才做得出很弱的band,但我後來訂的兩個
新基因,用一樣的材料一下子就成功了,也是用annealing溫50度做,其中一個比較不亮,
打算提高一下溫度,另一個則超亮的。
現在我只想到還沒嘗試拿別人的試劑來試,其他想不到了,高手們能不能救救我。
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05/16 17:31, , 1F
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05/26 14:52, , 2F
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