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[ Biotech ]
討論串[求救] 怎麼做都做不出來..............
共 6 篇文章
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自問自答好了，現在我終於找出原因了，原來問題出在dna身上，現在找出問題我不知道該哭還是該笑，高興的是總算找出原因，但難過的是我為了這個無聊的原因浪費了兩個月。如果我不要太害怕跟老師溝通，都悶著問實驗室的同學，我想我現在應該口試完畢了吧。就在所有方法都試遍後，只好老師地跟老師溝通，老師拿了十五個三、
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看了一下..你的產物都不是很大. 一般Taq的效率..一分鐘可以做1-2Kb. 你的應該只要40秒就好了. 做太久也許dNTP都浪費在不必要的部份(可是你dNTP又放不少..好像不會不夠). 有沒有可能是primer廠商沒有合成好. 也許序列有點不同(雖然機率不大). 所以primer黏上去的效果不
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哇，如果做不出來，tm低的減到10度都會變成四十多度了耶，真的可以嗎？可以的話我要衝了。. 我的確一直有這個問題，是因為加過量嗎？加過量會造成做不出來嗎？如果是說引子會互黏，真的會嗎？因為我都是參考paper來訂的耶。. serotonin transporter的primer. 5-GGC GTT
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一般應該是看primer的Tm值決定吧. 通常使用Tm-5度. 取兩個primer中Tm比較低的那個來計算. 如果做不出來就再減5度. 有沒有考慮過其他的問題?. ex.primer dimer. 另外請問一下你的產物大小預計是多少?. 妳的template是什麼?(plasmid? genome?
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