Re: [求救] 誘導表現蛋白質

看板Biotech作者Talen (找到答案了~)時間17年前 (2007/05/08 10:10)推噓2(2推 0噓 4→)

留言6則, 3人參與討論串3/9 (看更多)

※ 引述《u8524009 (VIP好人卡....)》之銘言： : ※ 引述《Talen (找到答案了~)》之銘言： : : 最近正在做表現蛋白質的實驗 : : 利用pET30a接入欲表現的蛋白質(約30 KD)後 : : 送入BL21(DE3)中加入IPTG以誘導表現出蛋白 : : 目前誘導表現情形很順利 28度C 6小時 : : 在破菌前有取 200 ul 確認過有誘導出來 : : 但問題是每次在破菌後我要表現的蛋白質會減少很多 : : 不知道是什麼問題? : : 希望各位前輩能提供一些建議　感激不盡～ : : 破菌的方法： : : Sonication　強度為３或４都用過　打十秒　停十秒　共１０分鐘 : : French press 使用大 Cell : : 但都依樣結果 : 要先問一下你所謂的破菌後蛋白質少很多..是你用那一個fraction去跑膠得到的結果 : 不曉得你有沒有測過你的目標蛋白質是soluble form還是inclusion body? : 假設你的蛋白質是inclusion body,而你取上清液去跑膠; : 亦或是你的蛋白質是soluble form,而你取離心後不溶的pellete去跑膠 : 都會得你像你所說的破菌後,蛋白質減少很多的現象謝謝你的回應～^^ supernatant 和 pellet 部分都有做我有用anti-his偵測我的目標蛋白是在 supernatant 破菌後取固定菌數 loading 跑 SDS-PAGE 發現我的目標蛋白相對量減少很多目前我在懷疑我的蛋白會不會被 degrade 是否可以加入類似PMSF的protease inhibitor來操作實驗呢？？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.213.132

推

pizzicato

05/08 13:26, , 1^F

05/08 13:26, 1^F

→

pizzicato

05/08 13:27, , 2^F

05/08 13:27, 2^F

→

pizzicato

05/08 13:27, , 3^F

05/08 13:27, 3^F