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作者 cyken 在 PTT [ Biotech ] 看板的留言(推文), 共20則

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[求救]關於Cloning construct的困難...

[ Biotech ]37 留言, 推噓總分: +10

作者: DolphinWendy - 發表於 2012/10/06 22:12(13年前)

35^F→cyken:你的算法根本錯誤，你的insert稀釋10倍來用都還嫌太濃10/14 22:47

36^F→cyken:回去重念高中化學再來做實驗10/14 22:50

37^F→cyken: ^國中10/14 22:53

Re: [求救] Cloning 的問題

[ Biotech ]6 留言, 推噓總分: +1

作者: cyken - 發表於 2008/01/22 00:18(18年前)

1^F→cyken:補充:盡量不要用單一個RE做 cloning01/22 00:45

2^F→cyken:容易發生self-ligation,反向insert,和多重insert01/22 00:47

4^F→cyken:今天算了一下濃度,insert濃度太高,所以修了文01/22 14:02

5^F→cyken:100uM -> 10uM ; 95C10min -> 95C5min ; insert 2uL -> 1 uL01/22 14:03

6^F→cyken:100uM是我在做 3-piece ligation 用的濃度01/22 14:04

[問題] GST-Fusion Protein的純化

[ Biotech ]17 留言, 推噓總分: +11

作者: rita1986 - 發表於 2007/03/02 19:57(19年前)

11^F推cyken:可能是lysis buf的問題,把flow thru和wash出來的都拿去跑膠03/03 12:10

[問題] 關於cloning

[ Biotech ]2 留言, 推噓總分: +2

作者: Adler - 發表於 2007/02/10 17:05(19年前)

1^F推cyken:請問你的insert來源? PCR? RE切? 還是合成的oligo?02/12 01:30

Re: [問題] 關於Ni2+ column

[ Biotech ]1 留言, 推噓總分: +1

作者: iceoo - 發表於 2007/01/11 00:45(19年前)

1^F推cyken:cell extract ? soluble fraction? 破菌後有離心取上清嗎？01/11 00:49

[問題] 請問~~哪一型的機器可以打破細菌?

[ Biotech ]13 留言, 推噓總分: +12

作者: jmzxat - 發表於 2007/01/05 12:04(19年前)

6^F推cyken:破yeast幾乎都是用glass beads,0.5mm的, Sigma有賣洗好的01/05 20:11

7^F→cyken:小量的在eppendorf裡面vortex,01/05 20:15

8^F推cyken:大量的話.... http://tinyurl.com/y28ctw 最上面那台01/05 20:19

Re: [求救] cloning求救...一直做到怪東西阿

[ Biotech ]2 留言, 推噓總分: +2

作者: isdorothy - 發表於 2006/12/31 01:35(19年前)

1^F推cyken:勝任細胞。。。。讓我想了很久。。。 XD12/31 02:09

Re: [求救] cloning求救...一直做到怪東西阿

[ Biotech ]9 留言, 推噓總分: +9

作者: werthers6925 - 發表於 2006/12/28 00:59(19年前)

6^F推cyken:距離一個bp的話,Hind3效率是零! Sal1還有61%效率12/28 13:48

[求救] cloning求救...一直做到怪東西阿

[ Biotech ]8 留言, 推噓總分: +5

作者: ssuny - 發表於 2006/12/27 19:58(19年前)

3^F推cyken:ligation的vector 放多少 (ng) ? 大概長多少colony ?12/28 00:20

4^F→cyken:有沒有 control組？不是埋頭苦幹兩個月就一定會成功，12/28 00:22

5^F→cyken:試著在每個步驟盡可能做positive and negative control12/28 00:26

6^F→cyken:這樣才能找出問題所在。12/28 00:28

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