Re: [討論] PCR技術
謝謝雜碎大哥XD
專業的講解非常清楚XD!!超級感謝
因為小弟非生物背景 所以還有很多問題
在下想問清楚!!
※ 引述《Ianthegood (雜碎。)》之銘言：
: 同學
: 你可能資料要再看清楚喔
: 電泳是用來分析DNA片段大小用的
: 如果DNA量不夠
: 電泳的靈敏度有限 跑出來還是會看不到
: PCR系列的技術是用來放大DNA片段用的
: 一般都是pcr放大完再用電泳來檢視結果這樣
: 然後你說的那個什麼熱交換 我真的不知道是什麼XD (通常是散熱器吧?)
: PCR是利用DNA在不同溫度兩股會分開與重新黏合的概念
: 加上合成酵素適合高溫
DNA再因為熱對流循環會造成三階段溫度
97度左右開始變性 52度左右黏合 74度左右擴增
97度會變性是因為DNA本身到這個溫度就會氫鍵裂解嗎?
還有就是說那您在這邊提到的說到合成酵素適合的高溫
是指說這個熱循環需要黏合的最低溫度是由此酵素決定的嗎?
以高溫低溫的循環讓DNA產生2的N次方的放大(N=cycle數)
: 一般都是跑30+cycles 放大幾倍可以自己算一下
: 電泳是把膠體放在溶液裡
: DNA再放在膠體裡
: 溶液通電之後導致大小不同的分子在膠內移動距離不同的現象
: 定量的部份就是染色後這些分子團顯現出的亮度
: 分子越多越亮
: 簡單說就是這樣
: 然後qPCR
: 就是你提到的螢光
: 利用的是具有螢光的原料來進行PCR
: 所以在每個cycle的放大中螢光就會逐漸增強
: 借此來達到定量的效果
: 那為什麼不全面放棄電泳呢
: 貴阿
: qPCR的機器耗材軟體有的沒的 而且template的純度要求很高
: 比起來電泳的成本跟自來水一樣(菸)
在電泳法對分離開來的分子量做量化處理也是使用螢光染劑?
那跟qpcr這裡的螢光染劑有什麼不同阿?
還有就是real-time pcr 跟qPCR差在哪裡阿?
有網友推文說差再定量方式?
真的很好奇
謝謝您>"<
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※ 編輯: karas888 來自: 140.120.11.175 (06/12 19:57)
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