[討論] PCR技術

看板Biotech作者 (爆熱武者 無雙抖抖丸 )時間13年前 (2011/06/12 16:48), 編輯推噓1(1014)
留言15則, 4人參與, 最新討論串1/4 (看更多)
請教各位 PCR是一種利用熱對流循環的方式讓 微量DNA進行複製放大的效果對吧!! 在下找了一下資料 同樣都要經過熱對流 1.電泳法 (分離DNA分子量) 2.即時PCR(用螢光染劑 在熱對流的循環過程中隨次數增加發光強度越強) 查到的資料是說1是傳統的方式 會有操作汙染 以及成本較高 費時等的問題 所以發展用螢光染劑的方式的即時PCR 那我的疑問是 我看了幾篇PAPER到現在還是有使用電泳法 原因是什麼? 那電泳法最顯著的缺點右是什麼呢?我不太明白 以現今發展即時PCR用螢光染劑的方法不是很好嗎? 為何不淘汰掉費時而且成本較高的電泳法這項技術? 而全部改採螢光染劑的方式? 謝謝大家!!^^ -- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.80.19

06/12 17:28, , 1F
你想問的是 RT-PCR 與 qPCR的差別吧?定量的方式有差!
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06/12 17:58, , 2F
realtime可以定量同時看到dynamic 電泳沒辦法
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06/12 18:00, , 3F
而且qPCT成本較高吧...
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*qPCR
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06/12 18:02, , 5F
電泳還是便宜好用阿... cloning跟簡單定量
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06/12 18:10, , 6F
還是不太懂 能不能用回文方式討論一下差別^^?
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06/12 18:41, , 7F
你可能沒搞懂這些實驗怎麼做 data差異在哪
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PCR的溫度重點是酵素,primer跟DNA 不是甚麼對流
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06/12 18:43, , 9F
我不知道你的資料是哪裡來的 請去看molecular cloning
06/12 18:43, 9F

06/12 19:42, , 10F
謝謝 我會去查詢的!!
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06/12 20:13, , 11F
我們隔壁實驗室的老師就是堅持用電泳定量基因的表現量 他
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認為僅用偵測螢光量推斷基因表現是不準的 最好去搭電泳結
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果(應使用BAND粗細與qPCR之Ct做再次確認) 但電泳定量的問
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題是有太多變因會影響BAND粗細(ex混合load dye時.load膠時
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.EtBr染色時間...變因很多) 目前qPCR用得還滿普遍的
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文章代碼(AID): #1Dz7rJL4 (Biotech)
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