Re: [求救] Vector only 的 control 比 vector + i …

看板Biotech作者 (六百)時間15年前 (2010/08/11 09:49), 編輯推噓2(208)
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我現在不是作 TA 是要接到 double digested 的 vector 裡面啊 kit 建議的用量是 vector 50ng, insert 三倍分子數啦 切 3ug, 回收 2.2ug, 回溶 40uL 剛剛好濃度啊 RE 一種放 1uL (10U) 理論上只作用一小時不是都超量超很大了嗎? 不過看板上大家都建議放更多? 下次試試看好了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 71.10.75.57

08/11 10:09, , 1F
我都放超量切overnight,如果你要切的兩個site很近的話
08/11 10:09, 1F

08/11 10:10, , 2F
enzymes互相干擾會比較難切~
08/11 10:10, 2F

08/11 11:07, , 3F
我都切3μg Vector 用 4μl(20U/μl)去切再用CIP 作用
08/11 11:07, 3F

08/11 11:09, , 4F
切個6小時 挑20個都得到我要的 你可以試試看 enzyme 多一點
08/11 11:09, 4F

08/11 14:33, , 5F
你酵素反應體積多少 太少會切不好 少說體積要50ul
08/11 14:33, 5F

08/11 14:34, , 6F
酵素的量要多加約6倍 但不超過總體積的1/10
08/11 14:34, 6F

08/11 14:41, , 7F
酵素的量要多加約6倍 但不超過總體積的1/10
08/11 14:41, 7F

08/11 19:43, , 8F
我想體積應該是不用那麼多啦...測試起來20ul算是不錯的。
08/11 19:43, 8F

08/12 08:22, , 9F
我比較建議50ul,如果要純化作後續實驗...20我覺得太少耶
08/12 08:22, 9F

08/12 10:58, , 10F
我作gel extraction 的 kit 最小 elute 體積是 30uL
08/12 10:58, 10F
文章代碼(AID): #1COW6qgR (Biotech)
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