Re: [求救] Vector only 的 control 比 vector + i …

看板Biotech作者 (六百)時間15年前 (2010/08/10 03:45), 編輯推噓0(0010)
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我想要用的那個 vector 序列上確定有酵素切位 但是沒錯 我現在就是在懷疑: 手上這管不是我抽的 midiprep 到底是不是標籤上寫的那個東西 以及品質如何 gel 上看起來大小是對 而且也很純 可是我們 lab 本來就有好幾支相關的衍生 vector 另外也不知道 buffer 裡面有沒有什麼怪東西... 酒精沒去除乾淨? (酒精太多影響酵素作用 好像有道理) --- TA construce 雙切以後看起來還滿乾淨的 就被切的 vector 以及我要的 fragment --- 打算作的幾件事: 1. double digest overnight 再試一次 2. 同時作 vector only with/without ligase 的 transform 至少可以確定是沒切到還是只切一刀 3. 同時拿手上這管 pCS2+ 直接 transform, 重抽 midi, 順便送 seqencing 看看 MCS 對不對 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 131.212.202.90

08/10 07:25, , 1F
你不分別做single digestion嗎 只切一刀能解釋為什麼V+I
08/10 07:25, 1F

08/10 07:26, , 2F
長比較少,因為只有一邊黏起來,另一邊黏不起來,所以有
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08/10 07:27, , 3F
vector and insert ligation的反而沒辦法form colony
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08/10 07:33, , 4F
做2.如果vector已經去P了,就算只切一刀跟切兩刀會差不多
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08/10 09:40, , 5F
分別作 single digest 以後跑膠有作過 看起來都正常
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08/10 09:40, , 6F
但是我現在想到我作 single digest 的時候, DNA 稀釋較多倍
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08/10 09:41, , 7F
可能因此減少了酒精什麼的雜質的干擾`?
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08/10 09:41, , 8F
至於 single digest 以後的 transform... 應該是沒有必要吧?
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08/10 11:16, , 9F
沒甚麼必要,那就等2的結果吧
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08/10 11:17, , 10F
我覺得有沒有酒精不是重點
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文章代碼(AID): #1CO5h3RD (Biotech)
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