[求救] western blot 全黑

看板Biotech作者 (我會好好加油^^)時間16年前 (2009/06/29 20:32), 編輯推噓4(402)
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請益各位 因為我第一次遇到這種情況@@ 我壓的protein 是 cleaved caspase 3 使用的抗體是 cell signaling 編號9661 的抗體 今天我做實驗 壓出來一整片都是黑的 結果關燈發現整片menbrane都發亮 我很確定我二抗沒有給錯啦@@ 且也有很努力的wash乾淨 因為抗體是跟別人要的 且我同學他也沒有做過這個protein @@ 有人跟我說 如果是 Polyclonal antibodies 的 他的專一性也會比較差 會是這個原因嗎? 該怎麼改善呢? 希望有做過的版友可以提供我一點意見 好讓我下次再試的時候知道該怎麼改進@@ 感恩感謝~!!!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.93.11

06/29 21:25, , 1F
可以先從降低抗體濃度試試 此外有時是抗體品質的問題
06/29 21:25, 1F

06/30 00:09, , 2F
抗體re-use, 再dilute, 另外, 可以等signal降低些再壓片.
06/30 00:09, 2F

06/30 00:11, , 3F
如果有螢光照相系統, 就直接scan, 減少expose.
06/30 00:11, 3F

06/30 03:24, , 4F
二抗在稀釋一點 試看看囉
06/30 03:24, 4F

06/30 10:40, , 5F
有blocking吧?!抗體的稀釋比例用多少呢?!
06/30 10:40, 5F

07/02 21:50, , 6F
應該是一抗的問題
07/02 21:50, 6F
文章代碼(AID): #1AIBHO5L (Biotech)
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