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討論串[求救] western blot 全黑
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#9
Re: [求救] western blot 全黑
推噓0(0推 0噓 2→)留言2則，0人參與, 最新作者boblu (六百)時間16年前 (2009/07/03 02:08), 編輯資訊
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看推文好像 Santa Cruz 真的常常碰到這種狀況？. 我個人是只用過兩三支 Santa Cruz 的抗體 大致都還堪用. 可能只是我運氣好吧. 倒是很好奇 就就免疫染色的原理來說. 抗體濃度 反映時間 blocking protein 的選用 這類反映條件最佳化的問題不論. 到底一抗要怎樣怎樣
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#8
Re: [求救] western blot 全黑
推噓4(4推 0噓 2→)留言6則，0人參與, 最新作者boblu (六百)時間16年前 (2009/07/02 02:14), 編輯資訊
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一抗品質不良而造成整片 membrne 全黑. 我個人認為可能性真的不高. 因為那表示該一抗 bind 到了你用來 blocking 的 protein 一抗作成這樣拿來賣 有點扯. 不過 要注意的是有些一抗確實是會抓到牛奶 所以要用 normal serium 來 block. --. ※ 發信站
#7
Re: [求救] western blot 全黑
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者Mrbrowncafe (嬰兒)時間16年前 (2009/07/01 18:30), 編輯資訊
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小弟的個人經驗是 這種情況 通常是"抗體"本身的問題. 然後 如果要換的話 他們會要你填一個complain form. 內容不外乎. 1.換成BSA blocking. 2.增加TBS的Tween-20 的量(譬如從0.1%改成0.5%). 3.稀釋一抗及二抗的濃度. 4.增加wash的時間 及次
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#6
Re: [求救] western blot 全黑
推噓1(1推 0噓 5→)留言6則，0人參與, 最新作者malakaki (神奇小馬)時間16年前 (2009/07/01 15:26), 編輯資訊
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請問一下, 你的二抗比例, 牌子. ECL 哪家的? P牌還是M牌?. 只有這抗體會這樣, 還是每種抗體都這樣?. CS牌的 caspase 3 不錯用, 是個幾乎沒有雜訊的好物. 家裡只有這支是買CS的嗎?. 其他有哪些牌子呢?. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From
#5
Re: [求救] western blot 全黑
推噓3(3推 0噓 2→)留言5則，0人參與, 最新作者SPK (雲淡風輕)時間16年前 (2009/06/30 23:38), 編輯資訊
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37℃ 1hr + 4℃ O/N~~~~~不知道你清不清楚這些動作的目的……有點亂搞一通~~. 37℃是為了弱bend而以加溫來加速加強一抗的作用通常都以分鐘數來計時的~~~，. 4℃ O/N是為了不要讓一抗亂認才以降溫來讓它慢慢反應~. 一般來說一抗就直接室溫（25℃）反應1~2hr即可，如果為了
(還有65個字)
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