[求救] primary culture cell
各位大大安安:
PI最近給我一個任務
要我culture "cerebullum of new born mice"
他應該是要培養神經細胞
之後要用electroporation 把DNA送進神經裡面......
但是我之前完全沒有primary culture cell的經驗
所以想跟大家請教幾個我查不到答案~
還有不大確定答案的問題
1.因為我第一次做,很不熟練,
所以一開始花了很多時間(大約要半小時/per mice@@)
在取出小腦,去掉腦膜,顯微鏡下切成小塊這些步驟....
不知道我花這麼久的時間,會不會讓細胞死了一大半??(我再切的時候
細胞是放在culture medium之中....medium 是依照protocol配置的)
如果我做太久會導致細胞大量死掉的話,有沒有其他方法可以補救?
(沒辦法我ㄧ開始真的是手殘不協調...我也很想快點弄完)
2.切完之後,因為沒有馬上要culture,所以依照protocol上面的敘述
把他們cryopreserve...冷凍在-70(加DMSO)....但是因為我一次要
犧牲五六隻老鼠,cryoperserve box又不夠,所以我每做完一隻
是放在冰裡面,等全部的sample都弄完了再一起放進-70
上次我ㄧ共花了三個小時才做完全部><(五隻)...請問
這樣子細胞會死光嗎??還有~我問我們那邊的博士後~他跟我說
(他是日本人)在他們那邊,他們神經細胞不冰-70度,
都是馬上culture起來,因為神經細胞冰起來很容易死掉
就算是放了DMSO也一樣...但是因為paper上面是寫可以冰起來
我又查不道這方面的資訊..所以想要確認一下哪個才是對的>//<
3.paper上面是寫可以culture 28天以上....
想要請教大家, new born的神經,在培養的時候,他的數量(生長)會增加嗎?
還是他只能分化?最多可以培養多久(或幾代??)有沒有什麼特別要注意的~
以增加存活率?...因為到時候要electroporation...怕細胞不夠到時候
全沒了@@
4.跟細胞培養無關的問題@@
我有爬文
但是還是想問問.....關於新生mice mark的問題
帶我的老師要我剪小鼠的腳趾.....有一些小鼠
會養超過半年....當他們長大之後
我要把它們抓起來~肚子朝上才能看腳趾
但是我有一點恐懼症~我敢抓尾巴,但是不敢抓他們的neck
所以現在正在練習怎麼把它們抓起來check 他們的腳趾
我的情況還蠻嚴重的
每次一碰到他們的脖子我都會有退縮反射
目前還不成功~我正在努力克服
但是可能需要一段時間
~所以想要請教大家
有沒有其他mark的方法
可以持續半年
又適合我目前的情況??(只要編號一到五)
(如果可以的話有沒有方法可以編號1到99@@??)
我是個新手菜鳥
這方面的知識我還不大懂~希望大大能夠教教我~或是給我ㄧ個指引
各訴我哪邊可以習得相關知識....
先謝謝大家的幫忙了........感恩~^^
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◆ From: 158.93.6.11
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