Re: [求救]請問PCR products用restriction enzymeꐠ…
:
: 你指的很淡是切出來的產物對吧？
: 原因是
: 1.你的DNA已經先被稀釋了5X 但這不是最主要的原因...
:
: 2.主要的原因是DNA的亮度取決於"片段長度跟量" （簡單的說就是nucleotide的量）
: 片段越短所要達到相同亮度 需要的數量就要更多
: 你的PCR product被RE切成更小的兩個片段 當然兩片段的亮度就會下降啦！
:
: 如果想要讓RE產物變亮一點就多提高加入的PCR product的量
: 如果怕RE切的不完全 可以拉長作用時間（1-2hr）
: 前提是你用的酵素不會因時間太長而亂切XD
:
嗯嗯~所以RE的量我就保持固定~只是再拉長時間囉?!
您剛說的每二十到三十分鐘要做的事~我在TRY的時後
都有做了!!不過我就是那起來vortex一下下~再又小烏龜離一下下
不知這樣會不會太劇烈?
剛有前輩提到始用KIT~但因為我們LAB真的沒啥金費
所以我一直都很克難的在做實驗~所以很多東西和方法
只能用現有或不再花錢要自己想辦法了!
: 再者 建議你做RE reaction時 每隔20-30min做一次spin down跟輕彈的動作
: 把蒸到蓋子上的水氣離心回溶液裡 以維持正確的濃度
:
: 還有一招就是...
: 因為酵素會逐漸失活
: 所以在反應時間超過一半之後 再加一點點(0.2-0.5ul就夠了)酵素進去
: 如果你用的酵素很貴的話...我不建議你這樣做...
: 但如果要這樣做的話...
: 那記得不要讓你老闆知道...XD
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: 以上 希望對你有幫助 祝實驗順利～
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