Re: [求救]請問PCR products用restriction enzymeꐠ…
※ 引述《albertwang (會思考的魚)》之銘言：
: ※ 引述《calmato (Anita~)》之銘言：
: :
不好意思~因為我是第一次接觸分生~很多東西都是自己try
或找資料或問人~所以有很多東西~不知該怎麼問或該注意什麼
~所以真的很不好意思~遇到很多問題卻自己一直沒法解決 >"<
廠商給的information 是只有說 To make 100uM stock solution
add 255 ul of buffer
我的working primer是從這裡面取10ul primer + 90 ul water
那我把我的所有try的條件po上來~但不知道這樣是不是您說的反應條件?
跑PCR ，total volume 30，water 19.85，primer Forward and reverse
各1，10x dNTP 3，10xPCR buffer 3 ，Taq 0.15 ，Template DNA 2
以上單位都是ul。但我的DNA濃度品質不一~OD從 40~800 ng/ul
使用restrition enzyme: PCR products 5，water 16.4，10x Buffer 2
50X SAM 0.6，enzyme 1；total volume 25，使用的廠牌是Fermentas
它的protocal是PCR reaction mixture 10ul(~0.1-0.5ug of DNA)
water 18 ，10X Buffer Tango 2，50XSAM 0.6，enzyme 1-2
因為考量到我的PCR products加10會切不完整，~所以才加5，但照我的想法
我的DNA量不算太少，切出來應該會很清楚，但不知為何拍出來照片都很淡
我一直找不出原因。
也想請問您剛說用酒精沉澱，是如何做呢?
以上很冗長，感謝您的指教!!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.68.5
推
08/14 11:25, , 1F
08/14 11:25, 1F
→
08/14 11:26, , 2F
08/14 11:26, 2F
→
08/14 11:28, , 3F
08/14 11:28, 3F
→
08/14 11:28, , 4F
08/14 11:28, 4F
推
08/14 23:25, , 5F
08/14 23:25, 5F
→
08/14 23:27, , 6F
08/14 23:27, 6F
→
08/14 23:30, , 7F
08/14 23:30, 7F
→
08/14 23:30, , 8F
08/14 23:30, 8F
討論串 (同標題文章)
以下文章回應了本文 (最舊先)：
完整討論串 (本文為第 3 之 10 篇)：