討論串[求救]請問PCR products用restriction enzymeꐠ…
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推噓0(0推 0噓 0→)留言0則,0人參與, 最新作者xenograft (努力嘗試學以致用中)時間17年前 (2008/08/15 02:18), 編輯資訊
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唔...根據以前的經驗 通常primer dimer不會多長. 跑膠時跑久一點就可以比較明顯的分出了. 而且應該要先check primer sequence是否會形成dimer. 然後根據下文的condition. 我覺得primer濃度可以再下降些. 我們實驗室是以總體積20μl primer濃
(還有411個字)

推噓4(4推 0噓 3→)留言7則,0人參與, 最新作者MrCAKE (Keep Working)時間17年前 (2008/08/14 17:59), 編輯資訊
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你可能要先克服無法做高濃度Agarose gel的問題. 這應該很快解決 可能先問問附近有做分生的實驗室吧. 不然把困難處po在這裡也可以. 其實你的198bp產物和primer應該用2%就可以分開了. 你的實驗重點是在用酵素切之前就要先確定沒有剩餘的primer的存在. 不然到時候可能無法區分切完
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推噓0(0推 0噓 0→)留言0則,0人參與, 最新作者calmato (Anita~)時間17年前 (2008/08/14 12:55), 編輯資訊
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我是用2%的argarous gel跑的. 我發現超過3%以上就非常難做出這個gel. 又很尷尬的是~敝實驗室主要不是做分生因此很多東西比較不專業. 我們只是利用一點基礎的分生實驗做為一種工具. 但光是這樣~對於毫無背景的我相當的吃力. 因為資源和資訊都不充足的之下,要做出東西. 我已經TRY很久了

推噓0(0推 0噓 0→)留言0則,0人參與, 最新作者albertwang (會思考的魚)時間17年前 (2008/08/14 12:36), 編輯資訊
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10x dNTP 3,Template DNA 2 這兩個可以少ㄧ點不過你已經可以做出來. 那就不用改了不然出不來又麻煩了. 使用restrition enzyme: PCR products 5,water 16.4,10x Buffer 2 不過兩個情況都太少ㄧ點. 除非你的product 粉濃
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推噓1(1推 0噓 1→)留言2則,0人參與, 最新作者calmato (Anita~)時間17年前 (2008/08/14 12:20), 編輯資訊
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嗯嗯~所以RE的量我就保持固定~只是再拉長時間囉?!. 您剛說的每二十到三十分鐘要做的事~我在TRY的時後. 都有做了!!不過我就是那起來vortex一下下~再又小烏龜離一下下. 不知這樣會不會太劇烈?. 剛有前輩提到始用KIT~但因為我們LAB真的沒啥金費. 所以我一直都很克難的在做實驗~所以很多
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