Re: [求救] 關於real-time PCR的問題
如果懷疑有污染到geno,mic DNA的話
可以設計一段noncoding region的primer
直接將cDNA以此段primer進行PCR
如果有放大出noncoding region的話就表示cDNA有被污染
我們實驗室有另外買DNase去作用RNA在翻成cDNA
如果你要的話 我再給你廠商跟貨號
※ 引述《crazyrange (熱血羽球)》之銘言：
: 我在萃取RNA之後 沒有用DNase
: 結果我在測量RNA量的時候 我也同時去測量DNA的量
: 的確也偵測到了DNA的量 而且還不低
: 我想請問一下
: 在我抽取的RNA中還有DNA的話
: 對於我接下來要做的RT會有很大的影響嗎?
: 我是這樣想的
: RNA是單股 DNA是雙股
: 可是在跑RT的時候 加入的過程中DNA會分解成單股
: 而加入的primer是random primer
: 這樣的話在做RT的時候 DNA是不是也會被反轉錄?
: 那如果在萃取完RNA後加入DNase去反應
: 是否之後在測量RNA濃度的時候就會測不到DNA的存在?
: 在RT之後的cDNA需要測cDNA濃度嗎?
: 還是說因為在跑RT之前的RNA就已經是固定量(ug)
: 所以RT出來的cDNA可以不用測 不同sample可以直接用同量(ul)的template
: 去跑real-time PCR?
: 整個疑惑
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