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討論串[求救] 關於real-time PCR的問題
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#4
Re: [求救] 關於real-time PCR的問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者meiosisLin (吽爸)時間17年前 (2008/04/25 00:02), 編輯資訊
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以個人最近操作相關實驗所遇到的問題. 整理一下可能需要小心的部分. 1.通常給RealTime PCR 使用的RNA sample會做DNase treatment的原因. 多是為了避免genome DNA干擾..如果你的cDNA片段在genome DNA也有一模一樣的. 利用SYBR green
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#3
Re: [求救] 關於real-time PCR的問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者belady (白衣天使黑心肝)時間17年前 (2008/04/24 23:47), 編輯資訊
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如果懷疑有污染到geno,mic DNA的話. 可以設計一段noncoding region的primer. 直接將cDNA以此段primer進行PCR. 如果有放大出noncoding region的話就表示cDNA有被污染. 我們實驗室有另外買DNase去作用RNA在翻成cDNA. 如果你要的話
#2
Re: [求救] 關於real-time PCR的問題
推噓3(3推 0噓 12→)留言15則，0人參與, 最新作者crazyrange (熱血羽球)時間17年前 (2008/04/24 19:13), 編輯資訊
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我跑完RT之後. 我試圖測量裡面的DNA濃度. 我的作法是同樣sample分別加入A:1ug及B:2ug RNA template進行RT. 結果出來之後我分別去測量裡面的DNA及RNA濃度. 得到的結果為. DNA濃度 A260/280 RNA濃度 A260/280. A 1.9732ug/ul
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#1
[求救] 關於real-time PCR的問題
推噓4(4推 0噓 7→)留言11則，0人參與, 最新作者crazyrange (熱血羽球)時間17年前 (2008/04/24 18:07), 編輯資訊
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我在萃取RNA之後 沒有用DNase. 結果我在測量RNA量的時候 我也同時去測量DNA的量. 的確也偵測到了DNA的量 而且還不低. 我想請問一下. 在我抽取的RNA中還有DNA的話. 對於我接下來要做的RT會有很大的影響嗎?. 我是這樣想的. RNA是單股 DNA是雙股. 可是在跑RT的時候 加
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