[求救] 關於real-time PCR的問題

看板Biotech作者 (熱血羽球)時間17年前 (2008/04/24 18:07), 編輯推噓4(407)
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我在萃取RNA之後 沒有用DNase 結果我在測量RNA量的時候 我也同時去測量DNA的量 的確也偵測到了DNA的量 而且還不低 我想請問一下 在我抽取的RNA中還有DNA的話 對於我接下來要做的RT會有很大的影響嗎? 我是這樣想的 RNA是單股 DNA是雙股 可是在跑RT的時候 加入的過程中DNA會分解成單股 而加入的primer是random primer 這樣的話在做RT的時候 DNA是不是也會被反轉錄? 那如果在萃取完RNA後加入DNase去反應 是否之後在測量RNA濃度的時候就會測不到DNA的存在? 在RT之後的cDNA需要測cDNA濃度嗎? 還是說因為在跑RT之前的RNA就已經是固定量(ug) 所以RT出來的cDNA可以不用測 不同sample可以直接用同量(ul)的template 去跑real-time PCR? 整個疑惑 -- 一個動物實驗背景現在要做分生的的研究助理 Western blot算分生? 為什麼覺得沒碰過DNA RNA cloning就不算做分生? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.120.7.114

04/24 18:29, , 1F
我要trizol抽 沒加DNase 跑qPCR-----OK
04/24 18:29, 1F

04/24 18:30, , 2F
取固定的rna翻成cDNA 再取固定體積RUN即可囉
04/24 18:30, 2F

04/24 19:08, , 3F
恩要怎麼避掉污染問題呀??
04/24 19:08, 3F

04/24 19:10, , 4F
你所說的測是?分光法嗎...那個是在測ATGC的喔~
04/24 19:10, 4F

04/24 19:12, , 5F
我建議~加DNase會比較好...
04/24 19:12, 5F

04/24 19:14, , 6F
我是用NanoDrop測的ND-1000
04/24 19:14, 6F

04/24 19:32, , 7F
俗稱 白色便當盒是也.... 那是小型分光 測的是ATGC
04/24 19:32, 7F

04/24 19:33, , 8F
你若不信~你可以拿ADP AMP ATP的粉末 溶在水裡去測
04/24 19:33, 8F

04/24 19:33, , 9F
一樣有值!! 所以他不能代表品質~品質要用電泳
04/24 19:33, 9F

04/24 19:34, , 10F
至於DNA的問題~真的擔心的話...就得用DNase去切
04/24 19:34, 10F

04/25 09:32, , 11F
原來是這樣阿,感謝A大,終於恍然大悟了
04/25 09:32, 11F
文章代碼(AID): #1845l9hP (Biotech)
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