※ 引述《Nikio.bbs@ptt.cc (工作有夠忙)》之銘言：
: 想請教大家一些問題 ><
: 今天壓western很怪，五分鐘、十分鐘 都一片空白，就狠下心給他壓了3小時，
: 結果整片MEMBRANE都黑了，但跑出了一堆一條條白色的bands，好像位置又是我要的
: protein @@ 見鬼，怎麼變成白色的呢？ 對了 連marker也變成白色的
: 和同學討論結果可能是：二抗太強，把ECL在壓片前就吃光光，可以解釋為何第一次壓
: 沒壓出來但長時間壓卻變白色的（被HRP吃掉以致於正確位置的protein無法顯色）
是有可能 不過這也太強了吧 @.@
: 不過好怪喔～如果說是我要target的protein還解釋的通，為何pre-stain也變白的@@?
有些 protein marker 會黏抗體 (無奈)
: 另外想請教大家：
: 如果壓不好，壓不出東西，或挑錯壓片的時間點，再加ECL去壓還壓的出來嗎？
: 很懷疑在membrane上的HRP是不是真的還能用？
: 因為我之前做ELISA有種經驗，就是不小心錯過顯色時間，沒測到linear OD的範圍，
: 想說：好吧！反正enzyme還是在盤子上，應該還有用，結果加下去就不呈色了！不然就是
: 呈色的時間拉長，或是沒辦法變的跟第一次加的時候一樣強..大家有這種經驗嗎？
: 小好奇～就是像這些顯色的enzyme，是不是作用後之後就失效，或是大幅降低酵素能
: 力了呢？
: 感恩 ><
HRP 是 peroxidase 會一直找 H2O2 來吃，所以不會這麼快失效
我的經驗是一兩小時內都沒問題
不過洗過一次 membrane 再加 ECL 會好一些
大概跟佔據 enzyme 位置的東西有關
<然而>強度可能會有差異 如果要定量的話要小心一些
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上Ptt3的理由,
1. 不太有人管. 小站自治. PttLaw板都砍掉了.
2. 開板很快. 因為沒人申請. NewBoard板生意冷清..
3. 不會遇到無聊人. 大都是海外留學生.
4. Ptt3==自由 本站所在地 不受中華民國各級法令管轄
歡迎流亡海外人士申請庇護
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◆ From: 91.3.241.43
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