[求救] Western怪怪說

看板Biotech作者Nikio (工作有夠忙)時間16年前 (2008/01/25 19:35)推噓5(5推 0噓 3→)

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想請教大家一些問題 >< 今天壓western很怪，五分鐘、十分鐘都一片空白，就狠下心給他壓了3小時，結果整片MEMBRANE都黑了，但跑出了一堆一條條白色的bands，好像位置又是我要的 protein @@ 見鬼，怎麼變成白色的呢？對了連marker也變成白色的和同學討論結果可能是：二抗太強，把ECL在壓片前就吃光光，可以解釋為何第一次壓沒壓出來但長時間壓卻變白色的（被HRP吃掉以致於正確位置的protein無法顯色）不過好怪喔～如果說是我要target的protein還解釋的通，為何pre-stain也變白的@@? 另外想請教大家：如果壓不好，壓不出東西，或挑錯壓片的時間點，再加ECL去壓還壓的出來嗎？很懷疑在membrane上的HRP是不是真的還能用？因為我之前做ELISA有種經驗，就是不小心錯過顯色時間，沒測到linear OD的範圍，想說：好吧！反正enzyme還是在盤子上，應該還有用，結果加下去就不呈色了！不然就是呈色的時間拉長，或是沒辦法變的跟第一次加的時候一樣強..大家有這種經驗嗎？小好奇～就是像這些顯色的enzyme，是不是作用後之後就失效，或是大幅降低酵素能力了呢？感恩 >< -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 211.76.175.170

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naturer

01/25 19:52, , 1^F

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a64toto

01/25 22:06, , 2^F

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a64toto

01/25 22:06, , 3^F

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