Re: [求救] 做了好多遍的clone，就是接不上去，why?
※ 引述《kutoushinji (所有人都跟我犯沖嗎?)》之銘言：
: ※ 引述《albertwang (會思考的魚)》之銘言：
: : 先問這兩個都是vector上還是自己設計的就是在primer上
: : 如果都是在vector何不試試其他的不要用平頭的
: 酵素切位是我設計的
: 一個是平頭的一個是sticky的
: : 再來就是
: : 你的buffer 出問題了
: : ATP額外加吧
: : 除非你有習慣一買來就把BUFFEER分裝
: : 不然滿容易ATP就壞了
: : 還是接不上去
: 好的，我今天試試看換新的buffer
: 我們家都是分裝的，可能是我的buffer壞掉了
clone的切位能不用blunt end就不要用blunt end
假如你的buffer沒問題的話
你可以試試讓他ligation更久一點
我試過4度C放個三天..效果還不錯
最快的方法還是重新設計一個primer改成兩端都是sticky end..
這樣也不一定要在做一次TA..你可以把這次的plasmid當作template
然後做PCR直接拿product去用..
總之有blunt end就是麻煩啦...
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◆ From: 59.112.214.105
推
01/25 21:42, , 1F
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