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討論串[求救] 做了好多遍的clone，就是接不上去，why?
共 7 篇文章
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#7
Re: [求救] 做了好多遍的clone，就是接不上去，why?
推噓1(1推 0噓 1→)留言2則，0人參與, 最新作者cloneting (1ting)時間18年前 (2008/01/23 20:57), 編輯資訊
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blunt end 沒有那麼難接啦. insert & vector處理好壞是關鍵. 限制酶量及作用時間參考酵素說明書. 兩種酵素是否可以一起切也是關鍵之一. NEB網站上有蠻多資料可以參考. 如果需要挖膠純化 動作盡可能快不要在UV box上太久. ligation 室溫2小時效果就不錯. hea
#6
Re: [求救] 做了好多遍的clone，就是接不上去，why?
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者albertwang (會思考的魚)時間18年前 (2008/01/23 20:44), 編輯資訊
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恩確定這一點後. 我提一下lab發生的事情. 我是接到ta clone. 然後切不下來跟你依樣primer上設計兩個re. 不過東西不是我設計的. 然後等sequencing回來後. 真相大明(抱歉沒圖). 原來primer錯了他在re 上lose幾個base. (送出去的和回報的文字檔都對). 所
(還有57個字)
#5
Re: [求救] 做了好多遍的clone，就是接不上去，why?
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者bluecsky (我要藍藍淡淡的天空)時間18年前 (2008/01/23 04:03), 編輯資訊
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clone的切位能不用blunt end就不要用blunt end. 假如你的buffer沒問題的話. 你可以試試讓他ligation更久一點. 我試過4度C放個三天..效果還不錯. 最快的方法還是重新設計一個primer改成兩端都是sticky end... 這樣也不一定要在做一次TA..你可以把
#4
Re: [求救] 做了好多遍的clone，就是接不上去，why?
推噓1(1推 0噓 3→)留言4則，0人參與, 最新作者kutoushinji (所有人都跟我犯沖嗎?)時間18年前 (2008/01/23 01:43), 編輯資訊
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酵素切位是我設計的. 一個是平頭的一個是sticky的. 好的，我今天試試看換新的buffer. 我們家都是分裝的，可能是我的buffer壞掉了. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 140.130.98.66.
#3
Re: [求救] 做了好多遍的clone，就是接不上去，why?
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者albertwang (會思考的魚)時間18年前 (2008/01/23 01:30), 編輯資訊
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先問這兩個都是vector上還是自己設計的就是在primer上. 如果都是在vector何不試試其他的不要用平頭的. 再來就是. 你的buffer 出問題了. ATP額外加吧. 除非你有習慣一買來就把BUFFEER分裝. 不然滿容易ATP就壞了. 還是接不上去. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(
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