Re: [求救] Cloning 的問題
※ 引述《canongirl (變 世上唯一不變)》之銘言：
: 大家好，目前我手上有一個clone 要做
: 老師請我先去合兩條primers 有53mer
: 序列(舉例)： primer1：5'ATCGCGTGATATGTGCTCATAGCT...3'
: primer2：5'TAGCGCACTATACACGAGTATCGA...3'
: 也就是兩條完全pair，因為這53mer其中包含我要clone的insert 另外有兩端各有BamHI
: 的切位可以接在vector上
: 但因為這兩條是ssDNA primer 老師叫把兩條primer混合在一起 然後heating
: 然後回到annealing 的溫度，然後他們就會接在一起了@@
: 真的會接在一起嗎？沒有polymerase的幫助也可以黏在一起？
: 有人有過做這樣cloning的經驗嗎 ？
: 天阿 救救我><
這我做過我是63mer
簡單的就只要放到熱約100度做水浴然後讓溫度自然的降溫
等到水溫跟室溫(差不多50度以下也行)差不多就可以去跑膠純化
至於buffer要專業點就仿PCR的加法DNTP TAQ 不需要
如果這樣你還怕的話
那就用專業溫度升降控制器請洽賣聚合連鎖反應儀器的廠商
前面有一家的廣告做的不錯(應該知道我講什麼吧)
一樣仿PCR SOL加法不需TAQ DNTP
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