[求救] Cloning 的問題

看板Biotech作者 (變 世上唯一不變)時間18年前 (2008/01/19 21:22), 編輯推噓4(402)
留言6則, 5人參與, 最新討論串1/4 (看更多)
大家好,目前我手上有一個clone 要做 老師請我先去合兩條primers 有53mer 序列(舉例): primer1:5'ATCGCGTGATATGTGCTCATAGCT...3' primer2:5'TAGCGCACTATACACGAGTATCGA...3' 也就是兩條完全pair,因為這53mer其中包含我要clone的insert 另外有兩端各有BamHI 的切位可以接在vector上 但因為這兩條是ssDNA primer 老師叫把兩條primer混合在一起 然後heating 然後回到annealing 的溫度,然後他們就會接在一起了@@ 真的會接在一起嗎?沒有polymerase的幫助也可以黏在一起? 有人有過做這樣cloning的經驗嗎 ? 天阿 救救我>< -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 219.84.233.122

01/19 21:43, , 1F
有看沒有懂@@...
01/19 21:43, 1F

01/19 21:50, , 2F
意思就是兩條primer不用polymerase就可以自己黏起來嗎?
01/19 21:50, 2F

01/19 21:51, , 3F
是要做RNAi嗎? pol是用來複製 DNA溫度下降就可以成雙股
01/19 21:51, 3F

01/19 21:55, , 4F
這樣做沒錯 也可以加polymerase在尾端加A進行TA clone
01/19 21:55, 4F

01/19 21:57, , 5F
直接用BamH1切可能會不好切 建議先送TA再切下來
01/19 21:57, 5F

01/21 20:14, , 6F
01/21 20:14, 6F
文章代碼(AID): #17aVc7rT (Biotech)
文章代碼(AID): #17aVc7rT (Biotech)