Re: [求救] Cloning 的問題
※ 引述《canongirl (變 世上唯一不變)》之銘言：
: 大家好，目前我手上有一個clone 要做
: 老師請我先去合兩條primers 有53mer
: 序列(舉例)： primer1：5'ATCGCGTGATATGTGCTCATAGCT...3'
: primer2：5'TAGCGCACTATACACGAGTATCGA...3'
: 也就是兩條完全pair，因為這53mer其中包含我要clone的insert 另外有兩端各有BamHI
: 的切位可以接在vector上
: 但因為這兩條是ssDNA primer 老師叫把兩條primer混合在一起 然後heating
: 然後回到annealing 的溫度，然後他們就會接在一起了@@
: 真的會接在一起嗎？沒有polymerase的幫助也可以黏在一起？
: 有人有過做這樣cloning的經驗嗎 ？
: 天阿 救救我><
你的意思是說你用合成的方式作成了兩個primer(我覺得用sequence會比較好)...
(sorry這是職業病,對於用字會很敏感...)
然後你要把這個complement sequence作成
5' ------------- 3'
3' ------------- 5'
這樣的狀態使它跟vector以BamH1切位接合...
然後只是要問經過加熱後以annealing的溫度作用完是不是能接合成上圖是吧...
答案是ok的,不用加任何東西也會黏在一起...
請安心作...
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