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討論串[求救] Cloning 的問題
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#4
Re: [求救] Cloning 的問題
推噓1(1推 0噓 5→)留言6則，0人參與, 最新作者cyken (Ken)時間18年前 (2008/01/22 00:18), 編輯資訊
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請你仔細看一下, 你上面設計的primer根本無法正確地如你希望地 anneal. 正確的primer應該要互為 reverse complement. primer1：5'ATCGCGTGATATGTGCTCATAGCT...3'. primer2：3'TAGCGCACTATACACGAGTATC
(還有1243個字)
#3
Re: [求救] Cloning 的問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者albertwang (會思考的魚)時間18年前 (2008/01/20 00:40), 編輯資訊
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這我做過我是63mer. 簡單的就只要放到熱約100度做水浴然後讓溫度自然的降溫. 等到水溫跟室溫(差不多50度以下也行)差不多就可以去跑膠純化. 至於buffer要專業點就仿PCR的加法DNTP TAQ 不需要. 如果這樣你還怕的話. 那就用專業溫度升降控制器請洽賣聚合連鎖反應儀器的廠商. 前面有
#2
Re: [求救] Cloning 的問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者sGoat (無三小羚羊)時間18年前 (2008/01/19 22:24), 編輯資訊
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你的意思是說你用合成的方式作成了兩個primer(我覺得用sequence會比較好).... (sorry這是職業病,對於用字會很敏感...). 然後你要把這個complement sequence作成. 5' ------------- 3'. 3' ------------- 5'. 這樣的狀態
#1
[求救] Cloning 的問題
推噓4(4推 0噓 2→)留言6則，0人參與, 最新作者canongirl (變 世上唯一不變)時間18年前 (2008/01/19 21:22), 編輯資訊
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大家好，目前我手上有一個clone 要做. 老師請我先去合兩條primers 有53mer. 序列(舉例)： primer1：5'ATCGCGTGATATGTGCTCATAGCT...3'. primer2：5'TAGCGCACTATACACGAGTATCGA...3'. 也就是兩條完全pair，因
(還有104個字)
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