[方法] 如何對plasmid做site-directed mutation ?

看板Biotech作者 (Tim)時間18年前 (2007/09/02 10:09), 編輯推噓6(6推 0噓 7→)
留言13則, 5人參與, 最新討論串1/6 (看更多)
我CLONE了一個gene進去plasmid中 不過因為是pcr product所以難免有mutation 請問要如何利用點突變的方法把他改回來呢 有沒有可以參考的文章 謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.230.180.142
推
09/02 10:16, , 1F
先做SEQUENCE確定有問題再來擔心吧~~
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推
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本末到置了吧,另外single clone哪來的mutation問題
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推
09/02 12:59, , 3F
就是做了sequencing發現有mutation啊！因為orf很長 所以
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推
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不想重新PCR重接 想直接拿有mutation的plasmid當template
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PCR短片段接回去
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有多挑幾顆定序嘛？
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用一般的Quickchange方法 設計primer 用pfu去PCR
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如果mutation太多 你還是重新check你來源的gene是不是
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問題,or 事RT-PCR過來的? 有時後多做幾個點突變 不會
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比再接一次clone輕鬆
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如果長到難免會出現mutation的長度..mutation完出現新的
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你們準備怎麼辦?
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不如多挑幾個去sequencing 找到對為止
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