Re: [問題] 請問ligation的一些問題
> : 你的insert太大了 理論上本來就不可能接的起來
> : 一般來說 只要超過vector大小1/3的insert都太大 但也許有高手覺得沒差(汗)
> : 在ligation過程中insert跟vector很難去碰撞到並且起反應
> 其實vector/insert都是DNA 當insert比vector大時把它成vector角色就好啦
> 而且DNA濃度也是關鍵要素之ㄧ,至少我切完回收後都有1ug 原則上insert小於
> 4K都蠻好接的 但若大於4K時 就真的需要一些技巧的 因為之前實驗室有再做BAC
> clone所以 接9K 5K是很稀鬆平常的事.....
>
> --
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> ◆ From: 140.109.227.169
f大大
可否請教一下您家都用什麼方式純化嗎
因為我們家 都亂用 大家都覺得純化效率很差
目前我取60ul(3000ng/ul)的dna去切 (我強烈懷疑這個質是假的)
但最後膠純化後體積100ul
濃度我估計只有5ug/ul 也就是我切了如此大量的dna卻只回收到500ng左右
所以想請教一下f大 用了多少dna去切 用什麼方式純化
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