[問題] 請問ligation的一些問題
就是我最近在做一個ligation
size分別為insert 3.4 kb vector 3.3kb
我用限制脢將vector切開後 再用CIP處理一小時
然後就進行ligation 以濃度比insert:vector=3:1來做
ligation的條件為16度 o/n
然後以heat-shock進行transform
再以selection medium的方式塗盤篩選
塗盤o/n後 都發現一顆都沒長><....
表示連self-ligation的結果也沒有
我已經做了三四次了 結果都是一樣
但是如果只transform空的vector(沒切過的) 就有長出來
我真的不知道是那裡出了錯
請教各位前輩給我一些建議~~感謝!!
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